AFM成像對樣品影響

苯甲酸鈉(C6H5COONa)，分子量:144.11，分析純，天津市福晨化學試劑廠生產。Balb/c系小鼠購自中山醫科大學實驗動物中心;RPMI-1640、胎牛血清(Fetalbovineserum，FBS)及β-巰基乙醇等細胞培養試劑購自GibcoBRL公司。
1.2淋巴細胞的準備
       將Balb/c系小鼠斷髓處死，在超凈臺內無菌分離雙側腋窩、鎖骨下、腹股溝淺表淋巴結和腸系膜淋巴結，PBS清洗，去除被膜，機械研磨，于200目不銹鋼網篩過濾。收集細胞，用4℃PBS1200r/min離心5min。洗滌細胞2次，重懸于RPMI-1640培養液(含10%FBS及50μmol/Lβ-巰基乙醇)，調整細胞密度為1×106/mL。臺盼藍染色觀察細胞活力，活細胞數占98%。添加SB溶液至淋巴細胞培養液中，終濃度分別為0wt%、0.05wt%、0.1wt%和0.2wt%。將細胞在24孔板接種后放置于37℃、體積分數為5%的CO2培養箱中培養1h、6h、12h、18h。
1.3樣品制備
       分別取與不同濃度SB作用1h、6h、12h、18h后的淋巴細胞，滴于新剝離的云母片上，使其自然鋪展，吸附10min，然后用2.5%的戊二醛(日本京都產)固定15min，用蒸餾水沖洗3次，室溫自然干燥。
1.4AFM成像
       將制備好的樣品置于AFM(AutoprobeCPResearch，Thermomicroscopes公司，USA)的XY掃描臺上，用監視器定位所要掃描的樣品區域，在空氣中室溫下利用接觸或非接觸模式成像。AFM圖像僅經過自帶軟件(IP2.1版)的平滑處理，以消除掃描方向上的低頻背景噪音。