ASA抗精子抗體ELISA試劑盒使用說明（二）

c）質控血清，在每支凍干的質控血清中加入1ml即用型的洗滌液。

4.3.4酶聯物，在15μl濃縮的酶聯物中加入9ml稀釋液，混合均勻。

4.4準備好試劑的儲存與穩定性

4.4.1配置好的洗滌液在2-8℃的環境下可穩定存放4周。冷藏時溶液會出現磷酸鹽沉淀物，室溫下又會溶解。

4.4.2樣品稀釋液，配置好的稀釋液在2-8℃的環境下可穩定存放2天，如果凍存于-20℃的環境下則可存放更長時間。

4.4.3標準品、質控品，應在每次實驗時臨時配置，并且僅能使用一次。

4.4.4酶聯物，配置好的酶聯物可在室溫下穩定存放20min。

4.5試劑盒的處理

按照國家官方條理處理試劑盒，具體信息請見產品的材料安全數據單。

4.6破損試劑盒的處理

如果試劑盒有破壞的請與IBL公司聯系或是提交您的投訴單，但自您拿到試劑盒后最遲不超過一個星期。嚴重破損的成分不能用于實驗，將其保存好直至找到最終的解決辦法。之后，按照官方條例將其處理掉。

5、樣品

5.1采集

血清：按照一般原則進行靜脈采血。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。

精液：精液樣品應當用1000的轉速離心15分鐘，之后用上清做實驗（精液）。

5.2儲存

血清、精液：采集的樣品存放于2-8℃的環境下時，必須在24小時內將其檢測掉。如果想將血清存放更長時間，可以將血清凍存于-20℃的環境下，避免反復凍融。

5.3預處理

血清、精液：用稀釋液將病人樣品按1：51的比例進行稀釋（例如：10μl樣品+500μl稀釋液），混合均勻。

6、實驗步驟

一般注意事項：實驗開始前，應當將所有的試劑和樣品都平衡到室溫。所有試劑混合時都應避免泡沫產生。為了避免交叉反應，每份試劑、標準品和樣品都應使用新的取樣吸頭。在實驗開始前，我們建議您將所有的試劑都準備好，將蓋子移去，將所需數目的板條置于板架上等。這些準備工作可保證每一加樣步驟間的時間間隔相同并且無中斷。將所需數量的板條固定到板架上準備加樣。

6.1實驗步驟

6.1.1加100μl標準品、質控品和樣本于相應反應孔中

6.1.2封板后37℃溫育60分鐘。

6.1.3每孔用300μl洗滌液洗板3次（建議您使用洗板機），吸水紙上拍干。注意：洗板步驟是否操作正確會明顯影響實驗的靈敏度和精密度。

6.1.4在每一微孔中加入100μl酶聯物。

6.1.5封板后37℃溫育60分鐘。

6.1.6每孔用300μl洗滌液洗板3次

6.1.7在每一微孔加TMB底物液100μl。

6.1.8室溫（18℃-24℃）溫育10-15分鐘。

6.1.9每孔加50μl終止液以終止底物反應，輕輕振板以使溶液混合均勻。

6.1.10加終止液后30min內在450nm讀取OD值。（參考波長：600-650nm）

6.2結果計算

標準品、質控品和病人樣本結果的計算：

在雙對數坐標紙上，以標準品的OD值對標準品濃度作一條標準曲線。用標準曲線計算未知樣品（已稀釋）總的抗精子抗體濃度（mIU/100μl）。最后將結果乘以0.5便得到未稀釋樣品的濃度（U/ml）。

                     50（稀釋因子）×10（100μl轉換成1ml的轉換系數）

                           1000（mU變成U的轉換系數）

自動計算：

用三次回歸、四參數或雙對數方程做標準曲線圖一般都可以獲得較好的效果。至于結果的準確度請件第7項（實驗特性）。樣品中抗體濃度高于最高標準品的應當用相應的稀釋液稀釋并重新檢測。最后將結果乘以相應的稀釋因子即可。

下面是抗精子抗體ELISA試劑盒標準曲線的一個典型范例：

6.3自動檢測

IBL公司的實驗室以證明：抗精子抗體ELISA試劑盒可用全自動酶免分析儀來做。操作說明可直接向IBL索取或從IBL公司的主頁上下載。具體信息請將“自動檢測”項。