ATCC細胞注意事項方法

ATCC細胞注意事項：

1、首先肉眼觀察細胞培養基顏色，然后再借助顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張），這樣做可方便后期的對比。

2、一定要用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經過殺菌處理）。

3、嚴格按照在無菌環境下操作的原則，打開細胞培養瓶。

4、將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（要換新的培養基培養細胞）。

5、用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。

6、1000rpm，5min離心，重懸細胞。

7、換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。

ATCC細胞操作流程：

主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡），co2孵箱。

細胞的復蘇培養傳代及凍存：

細胞的復蘇培養:從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。

細胞傳代:原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。