12 數據處理和結果判斷
記錄受試物各劑量組、空白對照(自發回變)、溶劑對照以及陽性誘變劑對照的每皿回變菌落數,并求平均值和標準差。
如果受試物的回變菌落數是溶劑對照回變菌落數的兩倍或兩倍以上,并呈劑量-反應關系者,則該受試物判定為致突變陽性。
受試物經上述四個試驗菌株測定后,只要有一個試驗菌株,無論在加S9或未加S9條件下為陽性,均可報告該受試物對鼠傷寒沙門氏菌為致突變陽性。如果受試物經四個試驗菌株檢測后,無論加S9和未加S9均為陰性,則可報告該受試物為致突變陰性。
13 試驗報告
試驗報告應包括以下內容:
(1)受試物名稱、理化性狀、配制方法、使用溶劑;
(2)試驗菌株:所用試驗菌株;
(3)代謝活化系統:所用誘導劑;
(4)試驗方法:簡述操作步驟,除受試物劑量分組外,還應說明空白對照、溶劑對照和陽性對照,陽性結果判定標準;
(5)結果:以列表方式報告受試物的Ames實驗結果(表1);
(6)結論。
表1 Ames試驗菌株的回變結果(平均值±標準差)
| 組別 | 劑量 (mg/皿) |
TA97 -( S9) +( S9) |
TA98 -( S9) +( S9) |
TA100 -( S9) +( S9) |
TA102![]() ![]() ![]() -( S9) +( S9) |
| 受試物 | |||||
| 自發回變 | |||||
| 溶劑對照 | |||||
| 陽性物對照 |
Ames試劑盒
本試劑盒省去了培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株 鑒定、菌株培養等時間,可以直接使用,大大縮短了實驗周期;試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染,菌株特性與活菌數目以及誘導 S9 活性均符合 Ames 試驗要求,實驗結果準確、可靠、重現性高。Ames試劑盒應用廣泛,可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝材料等多個方面的遺傳毒理學檢測。
| 包裝盒 | 產品組成 | v5.1(4菌) | V5.2(5菌) | 使用說明 | 保存條件 | ||
| 規格 | 數量 | 規格 | 數量 | ||||
| A盒 | 瓊脂粉Agar | 66g | 1 | 80g | 1 | 室溫 |
|
| 底層培養基GS | 100mL | 1 | 100mL | 1 | 使用前混勻 | ||
| 氯化鈉 | 3g | 1 | 3g | 1 | |||
| 2-氨基芴 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 200μg/mL,使用前混勻 | ||
| 甲基磺酸甲酯 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 使用前加1 mL滅菌蒸餾水混勻,濃度10μL/mL | ||
| 敵克松 | 1mL | 1 | 1mL | 1 | 500μg/mL,使用前混勻 | ||
| 疊氮鈉 | / | / | 0.5mL | 1 | 15μg/mL,使用前混勻 | ||
| 2-氨基蒽 | / | / | 0.5mL | 1 | 20μg/mL,使用前混勻 | ||
| S9反應液 | 42mL | 1 | 42mL | 1 | 使用前混勻 | ||
| 底層培養基VS | 100mL | 1 | 100mL | 1 | 使用前混勻 | ||
| B盒 | HB溶液 | 2.5mL | 1 | 2.5mL | 1 | 使用前混勻 | -80℃下長期保存,可保存6個月。-20℃可短期保存3周。請勿反復凍融。 |
| 1,8-二羥基蒽醌 | 0.5mL | 1 | 0.5mL | 1 | 1mg/mL,使用前混勻 | ||
| S9 混合物 | 1.4mL | 5 | 1.4mL | 6 | 使用前加2.86 mL冰冷滅菌蒸餾水復溶 | ||
| TA97菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | 使用前混勻 | ||
| TA98菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
| TA100菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
| TA102菌株 | 5.0mL | 1 | 5.0mL | 1 | |||
| TA1535菌株 | / | / | 5.0mL | 1 |
誘導 S9 采用國際先進無菌凍干干燥工藝制成,實現了誘導 S9 酶活性的穩定保存,同時有效防止了細菌污染。實驗時用 S9 反 應液溶解混勻。
2. 實驗菌株采用先進工藝規模化制備,出廠前經過嚴格的質量檢測,低溫貯存條件確保了實驗菌株的長期穩定性。實驗時混 勻后即可直接使用,節省了菌株鑒定、活化處理以及菌液濃度調整等時間。
3. 實驗陽性對照試劑種類覆蓋整個 Ames 實驗要求,在添加和不添加 S9 的情況下均可以誘導實驗菌株呈現陽性反應。陽性對照 試劑采購自國際大品牌公司,按照 Ames 實驗需求精準定量分 裝,出廠前經過實驗檢測,陽性對照試劑的長期穩定性有質量 保證。
4. 底層培養基 VS、GS 以干粉形式提供,便于培養基長期穩定 保存。使用前只需添加蒸餾水滅菌處理即可,試劑瓶采用耐高 溫材料,因此可以直接向試劑瓶中添加所需劑量的蒸餾水。
5. 頂層培養基 HB 凍干球采用先進無菌凍干干燥工藝制成,使用前需先用滅菌蒸餾水溶解,然后用 0.22μm 濾膜過濾除菌。
試劑盒應用范圍
本試劑盒應用范圍非常廣,可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝 材料等遺傳毒理學檢測。
傳統實驗操作不足
周期長——培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株鑒定、菌株培養 等耗費大量時間。 穩定性差——雜菌污染、活菌數不符合要求、實驗試劑配制不準 確等都會導致實驗失敗。
試劑盒優勢
便捷—— 本試劑盒省去了培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株 鑒定、菌株培養等時間,可以直接使用,大大縮短了實驗周期。 準確——本試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染, 菌株特性與活菌數目以及誘導 S9 活性均符合 Ames 試驗要求,實 驗結果準確、可靠、重現性高。
穩定—— 本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。
試劑盒使用操作流程
實驗器材、試劑準備:三角瓶、5mL 或 15mL 試管、100μl 和1000μl 槍頭、0.22μm 濾膜、注射器、平皿、二甲基亞砜、滅菌 蒸餾水等;
2. 設置待測物劑量,配制各劑量無菌待測物溶液;
3. VS、GS 培養基加水溶解并滅菌,配制底層培養基;
4. HB 球加滅菌蒸餾水溶解,充分混勻,然后過濾除菌;
5. 實驗當天配制頂層培養基,2ml 分裝,然后 45℃水浴保溫;
6. 用無菌蒸餾水溶解 S9 復合物并配制 S9 反應混合液;
7. 開展 Ames 實驗,將 2mL 頂層培養基+100μL 菌液+100μL 待測 物或陽性底物+500μL10% S9 混合液混勻,傾倒于底層培養基(實驗室溫度低時傾倒的頂層培養基易冷凝,可將底層培養基 放置于 37℃培養箱一段時間,然后再傾倒頂層培養基);
8. 待頂層培養基冷凝后,將實驗平皿放入 37℃培養箱,培養 48h后觀察實驗結果;
試驗方法
試驗方法主要是平板摻入法和預培養平板摻入法,具體操作如下:
平板摻入法
a) 準備所需底層培養基平皿若干。
b) 融化頂層培養基分裝于無菌小試管,每管2 mL,在45℃水 浴中保溫。
c) 在保溫的頂層培養基中依次加入測試菌株菌液0.1 mL,混 勻;加受試物0.05 mL~ 0.2 mL(一般加入0.1 mL。需活化時 另外再加入10 % S9反應混合液 0.5 mL),再混勻,然后迅 速傾入底層培養基上。轉動平皿,使頂層培養基均勻分布 在底層上,平放固化,37℃ 培養 48 h觀察結果。
d) 另做一陽性對照、溶劑對照和未處理對照。陽性對照不加 受試物,只加標準誘變劑(即試劑盒陽性對照試劑,見表2);溶劑對照加除受試物和標準誘變劑以外的所有試劑, 如溶劑二甲基亞砜等(光譜純或分析純);未處理對照只 在培養基上加菌液;其他方法同上。
2. 預培養平板摻入法 預培養對于某些受試物可取得較好效果。因此可根據情況確定 是否進行預培養。在加入頂層瓊脂前,先進行以下預培養步驟:在試驗中,將受試物(需活化時另加入10% S9反應混合 液)和菌液,在37℃中培養20min,或在30℃中培養30min,然 后再加2mL頂層瓊脂,其他同上述平板摻入法。