注意事項
(1)熒光抗體試劑中存在凝聚IgG的影響，凝聚IgG可以和B細胞表面Fc受體結合出現假陽性，因此，為避免出現凝聚IgG須注意：
①不能使用F/P克分子比值過高的熒光抗體，一般以1～3為宜。
②含低濃度蛋白的熒光抗體低溫保存不穩定，一般不應低于2mg/ml。
③低溫保存的熒光抗體不可反復凍融，使用前150000r/min離心30min，除去凝聚物。
(2)活的淋巴細胞作免疫熒光染色時，在全部試劑中(標記抗體、Hank液等)均需加NaN3，以限制細胞膜的流動性。否則會出現帽狀熒光和吞噬現象，熒光細胞實際數下降。
(3)用抗IgG熒光抗體染色時，可由于標本中含有抗原一抗體(IgG型)免疫復合物與B細胞表面Fc受體結合，表現為熒光陽性。為此，有人建議用熒光標記抗F(ab)2抗體染色，以排除Fc受體被著染。
由于抗B細胞表面特異分子(CD19、CD20等)單克隆抗體的問世，因而人們開始傾向于應用熒光素標記的抗CD19或CD20的單克隆抗體直接與外周血淋巴細胞反應；或用抗CD19和CD20的單克隆抗體(第一抗體)先與淋巴細胞反應，再與熒光素標記的兔或羊抗鼠IgG(第二抗體)結合，熒光顯微鏡下計數或流式細胞術來計數外周血B淋巴細胞。
檢查過程
(1)取肝素抗凝血2ml，加等量Hank液混勻，重層于分層液上，2000r/min，離心20min。取出淋巴細胞層，加Hank液，洗3次，1200r/min，離心10min，調整淋巴細胞濃度為1×107/ml，取0.1ml分裝兩管。
(2)將淋巴細胞懸液再用Hank液洗1次，棄去上清，用濾紙吸去管內壁剩余液體，分別加兔抗人IgG及抗人IgM熒光抗體2滴(約0.08ml)，輕搖后，放37℃溫箱30min。
(3)從溫箱取出用Hank液洗兩次，1000r/min離心10min，小心吸去全部上清，將管底沉淀的細胞加入50% PBS緩沖甘油1滴，混勻后取1滴加入載玻片上，覆以蓋玻片，置熒光顯微鏡下觀察。