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  • 發布時間:2020-09-08 08:45 原文鏈接: Bradford法蛋白質含量的測定

    原理:這一方法基于考馬斯亮藍G-250 有紅藍兩種不同的形式。在一定濃度的乙醇及酸性條件下,可配成淡紅色的溶液,當與蛋白質結合后,產生藍色化合物,反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595nm處有最大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系,因此可檢測595nm的光吸收值的大小計算蛋白的含量。
    溶液:
    1)Bradford儲存液
    100ml95%乙醇
    200ml88%磷酸
    350mgServaG藍
    室溫下長期保持穩定。
    2)Bradford工作液
    425ml雙蒸水
    15ml95%乙醇
    30ml88%磷酸
    30ml Bradford儲存液
    用濾紙過濾,保存于室溫棕色瓶中,可保存數周,但在使用前需要過濾。
    3)配制1mg/ml牛血清蛋白(BSA)
    做標準曲線:
    取樣品即可測量。
    注意事項:
    1、樣品制備,樣品制備是做好2-d 的關鍵,樣品中離子濃度不能過大,最好用新鮮的樣品提取蛋白質,如果不確定蛋白提取情況,建議先跑sds-page檢驗。
    2、上樣量的問題, ipg 膠條是13 厘米的上樣量在50ng-80ng之間,上樣量不合適,豐度低的將會被豐度高的所遮蓋。
    3、ipg 膠條ph 的選擇,根據不同樣品選擇不同pH值。
    4、針對不同的蛋白質,分離膠的濃度需調整。

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