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  • 發布時間:2020-07-13 11:37 原文鏈接: BrdU標記法檢測原代細胞增殖

    BrdU標記法檢測原代細胞增殖

    1.細胞以1.5×105/ml細胞接于直徑35ml培養皿中(內放置蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕數細胞處于G0期
    2.終止細胞培養,加入BrdU(終濃度30μg/L),37℃,孵育40min。
    3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。
    4.甲醇/醋酸固定10min。
    5.經固定的玻片空氣干燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
    6.5%正常兔血清封閉。
    7.甲酰胺100℃,5min變性核酸。
    8.冰浴冷卻后PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。
    9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。


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