1、細胞以1.5×105 /ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處于G0 期。
2、終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3、棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、經固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2 -甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6、5％正常兔血清封閉。
7、甲酰胺100℃，5min變性核酸。
8、冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9、按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。