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  • 發布時間:2020-09-08 11:02 原文鏈接: DNA的凝膠電泳(gelelectrophoresis)

    一、原理

    瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠是分離和純化DNA片段的標準方法。聚丙烯酰胺凝膠電泳適用于分離小分子的核酸;瓊脂糖凝膠孔徑較大,被應用于大分子核酸的分離和純化。在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質中,DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對數成反比。當用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(EB)染色,在紫外光下至少可以檢測出1~10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。

    二、實驗試劑

    硼酸 Tris堿EDTAEB瓊脂糖溴芬蘭等

    三、實驗步驟

    (1)稀釋緩沖液的制備用5XTBE配置成0.5×TBE稀釋緩沖液,待用。

    (2 ) 膠液的制備稱取0.4g瓊脂糖,置于200ml錐形瓶中,加入50ml 0.5×TBE

    (3) 稀釋緩沖液,放入微波爐(或電爐)上加熱至瓊脂糖全部熔化,取出搖勻,此為0.8%瓊脂糖凝膠液。

    (4) 膠板的制備將有機玻璃膠槽兩端分別用橡皮膏緊密封住。將封好的膠槽置于水平支持物上,插上樣品梳子。向冷卻至50~60℃的瓊脂糖膠液中加入溴化乙錠(EB)溶液,使其終濃度為0.5μg/ml。

    (5) 加樣取5 μl提取的植物DNA溶液與2μl 6×上樣液混勻,用微量移液槍小心加入樣品槽中。

    (6) 電泳加完樣后,合上電泳槽蓋,立即接通電源。控制電壓保持在60~80V,電流在40mA以上。

    (7) 染色未加EB的膠板在電泳完畢后移入0.5μg/ml的EB溶液中,室溫下染色20~25分鐘。

    (8) 觀察和拍照在波長為254nm的長波長紫外燈下觀察染色后的或以加有EB的電泳膠板,并繪區帶電泳圖制。

    【注意】溴化乙錠是強誘變劑,具有高致癌性,要求在整個操作過程中必須帶一次性手套。

    三、相關試劑配制

    (1) 5xTBE緩沖液(100ml):Tris-base5.4g

    硼酸2.75g

    0.5M的EDTA(pH8.0) 2ml

    用滅菌水定容至100ml

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