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  • 發布時間:2019-08-02 23:35 原文鏈接: DNA片段純化與回收常見問題分析

    Q:利用凝膠回收試劑盒DNA回收效率較低或者未回收到目的片段?
    A:
    可能有以下幾個原因:
       1. 膠塊未完全溶解,可適當延長水浴時間,并增加上下顛倒次數輔助溶解;
       2. 膠塊體積太大,應先將其切為小塊,分多次回收;
       3. 電泳緩沖液pH太高,硅基質膜在高鹽低pH結合DNA,如pH太高,應作適當調整;
      4. 漂洗液中未加入無水乙醇。

    Q:能否改用去離子水洗脫?
    A:可以。但是實驗室所用純水一般pH偏低,可利用NaOH適當調高其pH值,以增加洗脫得率。

    Q:回收DNA進行后續酶切實驗?
    A:洗脫產物含有殘留的乙醇會影響酶切,請確保徹底去除漂洗緩沖液,具體方法參見回收效率低的解決方案。

    Q:可否使用更小洗脫體積(小于說明書提供的最小洗脫體積)進行洗脫以提高濃度?
    A:不可以。因為說明書提供的最少洗脫體積是能完全覆蓋吸附膜的最小體積,若減少體積則不能將DNA完全洗脫下來。

    Q:電泳檢測只有一條目的帶,可否選用凝膠回收試劑盒?
    A:可以。如果后續實驗對片段純度要求較高,建議即使只有一條帶,也可以切膠純化,其回收得到片段的純度可能要比直接回收高一些。

    Q:瓊脂糖凝膠膠塊不溶?
    A:1. 瓊脂糖質量不好。2. 含目的片段的凝膠再空氣中放置過久,使膠塊失水、干燥,建議切膠后立即進行回收或將膠塊保存在4℃或-20℃。3. 制膠的電泳緩沖液濃度過高或陳舊。

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