核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,可以用于:(1)核酸探針;(2)核酸擴增;(3)序列分析等技術。
| 實驗方法原理 | 帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常 在瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠中進行,濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯酰胺可形成分子篩網孔大小不同的凝膠,可用于分離不同分子量的核酸片段。 |
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| 實驗材料 | DNA樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 瓊脂糖干粉電泳緩沖液載樣緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 三角燒瓶微波爐電泳儀電泳槽 |
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| 實驗步驟 | 1. 用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;
2. 根據欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml) ;
3. 放入到微波爐內加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉以充分 混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;
4. 室溫下 30~ 45 分鐘后凝膠完全凝結, 小心拔出梳子, 將凝膠安放在電泳內槽;
5. 向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面 1mm 為宜,如樣品孔內有氣 泡,應設法除去;
6. 在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液(loading buffer) ,混勻后,用槍 將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內;
7. 接通電源,紅色為正極,黑色為負極,切記DNA 樣品由負極往正極泳動 ( 靠近加樣孔的一端為負) 。一般 60~100V 電壓,電泳 20~40min 即可;
8. 根據指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳;
9. 電泳完畢,關上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子 量標準 Marker 比較被擴增產物的大小。 收起 |
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| 注意事項 | 制膠時需均勻融膠,避免影響后續跑膠結果。 |
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| 其他 | 除去瓊脂糖核酸電泳之外,還可以進行聚丙烯酰胺凝膠電泳,后者適用于寡聚核酸的分離。 |
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