[ 實驗原理 ]
人外周血T淋巴細胞表面具有綿羊紅細胞受體,在體外一定條件下將人淋巴細胞與綿羊紅細胞兩者混合,可以形成以T細胞為中心,周圍黏附著多個綿羊紅細胞的花環,為E花環試驗（erythrocyte
rosette test）。應用最廣的有總E花環試驗（Et,t為total的縮寫）和活性E花環試驗（Ea,a為active 的縮寫）。
Et代表被檢標本中T淋巴細胞的總數,Ea則反映具有高親和力綿羊紅細胞受體的T細胞數,這部分T細胞的免疫學功能更能反映機體細胞免疫功能和動態變化。
E花環試驗主要用于了解機體細胞免疫功能。廣泛應用于腫瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,為某些疾病診斷和防治提供免疫學方面的重要參考。
[ 實驗材料 ]
1.1%肝素水溶液。
2.Hanks'液(無Ca2+、Mg2+)PH7.4-7.6。
3.淋巴細胞分離液（市售商品）。
4.綿羊紅細胞懸液：取新鮮綿羊血以1:1的比例與愛氏血球保存液混合，置4℃備用,2周內使用。
5.0.8% 戊二醛、姬姆薩染液。
6.離心機、水浴箱,顯微鏡等。
[ 實驗方法 ]
1.無菌抽取患者靜脈血1毫升,加入事先有0.05毫升肝素液的試管內,混勻抗凝。
2.加Hanks'液1毫升于上述試管稀釋血液,然后緩慢加入盛有1毫升淋巴細胞分離液的試管中,注意不要打亂交界液面。
3.2000 轉/分鐘水平離心20分鐘。
4.小心吸取血漿層和分離液層之間的白色膜狀的淋巴細胞層,Hanks'液洗滌兩次,最后用含20%小牛血清的Hanks'液將細胞調成 2X106/毫升。
5.將愛氏液保存的綿羊紅細胞用 Hanks'液洗滌三次，棄上清，將壓積紅細胞用 Hanks' 液配成 1% 細胞懸液（ 8X10 7 / 毫升）。
6.Et 試驗：將淋巴細胞懸液 0.1 毫升和綿羊紅細胞 0.1 毫升混勻（細胞數合適比例為 1 ： 100 ）， 37 ℃ 水浴 10
分鐘，低速離心 500 轉 / 分鐘， 5 分鐘，再置 4 ℃ 2小時或過夜。取出后棄去大部分上清，輕輕搖勻，加0.8% 戊二醛 2
滴固定數分鐘后涂片，自然干燥后加 1 滴姬姆薩染液，覆以蓋玻片，高倍鏡觀察。凡淋巴細胞周圍吸附 3 個或以上綿羊紅細胞者為陽性花結細胞。
7.Ea試驗:將淋巴細胞懸液0.1毫升和綿羊紅細胞0.02毫升混勻（兩者比例為1:20）,低速離心500轉/分鐘,5分鐘,棄去大部分上清,輕輕搖勻,加0.8%戊二醛 2滴固定數分鐘后涂片,其余程序同Et試驗。
[ 實驗結果 ]
隨機計數 200 個淋巴細胞，記錄其中形成花結的和未形成花結的淋巴細胞數,然后根據下列公式計算E花結形成百分率：E花結形成百分率 = 形成花結細胞數/（花結細胞數+未形成花結細胞數）X100%,一般正常值Et為50-70%,Ea正常值為 25—35%。
[ 注意事項 ]
1.一定要用新鮮血，否則會影響細胞活性，且綿羊紅細胞受體會從T細胞表面脫落。
2.計數前，重懸和混勻細胞要輕柔，否則花結會散開消失。