EHFELISAKit使用說明

此酶免試劑盒可用于流行性出血熱(EHF)病人血清中抗漢坦病毒IgG和IgM的定性檢測。

前言簡介
流行性出血熱(EHF)又稱腎病綜合征出血熱(HFRS)，是由漢坦病毒(Hantaan type)引起的。與流行性腎病相比(因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染)，HFRS的傳染性更嚴重，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區，通過直接接觸嚙齒動物、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農民和露營者都特別容易受到危險。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強度與結合的抗體量成正比。之后用酶標儀讀取OD值。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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貯存及穩定性
試劑盒應當在2~8℃運輸和儲存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內2~8℃能保存到有效期。準備好的試劑的儲存及其穩定性在相應章節已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
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樣品采集和貯存EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
人血清EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

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試劑盒成分EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

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實驗做需器材但試劑盒沒提供EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
 

1、精確微移液管  體積(5; 20; 50; 100; 200; 1000 μL)

2、渦旋混合器

3、保溫箱, 37°C

4、試管(用于樣品稀釋)

5、8道微量移液器

6、洗瓶,自動或半自動洗板機

7、酶標儀

8、雙蒸水或去離子水

9、吸水紙,吸嘴,計時器

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實驗前準備EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
實驗前將試劑盒平衡至室溫(18-25°C).含結晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實驗前將其冷卻至至室溫(18-25°C)
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稀釋濃宿成分的準備(以測32孔為例)EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
提示:實驗前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

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樣品稀釋EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

提示:未稀釋樣品可于-20°C下保持數月
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實驗步驟EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
1.將100μl即用型陽性質控、陰性質控、參考對照質控和稀釋血清樣品(如是IgM樣品,需用類風濕因子吸附劑前處理)加入到相應的微孔中。
2.膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3.移除膠粘薄膜, 棄除孔內反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4.每孔中加入100μl稀釋酶聯物(IgG 或IgM)
5.膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6.移除膠粘薄膜, 棄除孔內反應液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7.加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時間間隔。避免產生氣泡。
8.每孔中加入100μl TMB底物液
9.室溫(18-25°C)溫育10分鐘
10.每孔中加入100μl終止液終止底物液反應。
11.20分鐘內于酶標儀450nm處讀取OD值。(參考波長：650nm)
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結果計算EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。
用病人樣品的OD值比上參考對照質控的OD值計算檢驗結果
A病人樣品/ A參考對照質控= Q
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IgG抗體：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。

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IgM抗體：EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。EHF ELISA Kit。