隨著酶聯免疫分析技術在醫學及生物學領域的廣泛應用，使體外檢測各種細胞因子及抗體研究有了新的突破。在研究免疫應答機制時以往常用用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測體液中游離的細胞因子（CK）或抗體，但由于游離的循環抗體或CK的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結合，而不能確切的反映體內的抗體及CK的水平。80年代，國外的科研工作者根據ELISA技術的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和CK分泌細胞的固相酶聯免疫斑點技術（ELISPOT）。
| 實驗材料 | 抗原 |
|---|
| 試劑、試劑盒 | PBSPRMI1640培養基氯化銨 |
|---|
| 儀器、耗材 | PVDF膜96孔板 |
|---|
| 實驗步驟 | 1. PBS 溶解抗原為30 μg/ml，加100 μl/孔于PVDF 膜鋪底的96 孔滅菌板過夜； 2. 第二天吸去包被液后，加5％FCS 的PRMI 1640 培養基100 μl 封閉1 小時，37℃； 3. 準備脾細胞懸液（用氯化銨去除紅細胞，制備成單個脾淋巴細胞懸液）； 4. 從1 × 106/孔開始，按1:3 的稀釋度開始逐孔稀釋做不同濃度梯度，并做3 個復孔，37 ℃靜置培養5 小時； 5. PBS 洗3～5 次，生物素化的抗鼠IgG 二抗孵育30 min； 6. PBS 洗3～5 次，鏈親和素標記的堿性磷酸酶孵育30 min； 7. PBS 洗3～5 次，用底物BCIP/NBT 顯色，顯微鏡下觀察顯色反應，顯色后及時終止反應； 8. 計數每孔中的斑點數目，計算每106 個脾細胞中抗體分泌細胞數量。 展開 |
|---|
