FLIPRTETRA系統檢測細胞內PH值變化的實驗（二）

細胞清洗

染料加載后并添加了NH₄Cl溶液，需要用清洗緩沖液清洗幾次以去除細胞外的染料。所有清洗步驟中均需含有20 mM NH₄Cl。建議使用Molecular Devices公司的洗板機，適用于96孔或384孔板，可調節高度和速率。

從FLIPR系統得到的高質量數據一部分取決于細胞清洗環節的洗板機性能，是否可以保證最后一次清洗結束后每個孔中剩余的體積是一致的。手動清洗后得到的結果差異性更大。另外，如果手動清洗切記注意不要在兩次清洗步驟之間吸干孔中溶液使得細胞直接暴露在空氣中。

注: 清洗緩沖液和稀釋化合物的緩沖液是不一樣的。

運行實驗

實驗前一天將細胞種在 實驗前一天將細胞種在 實驗前一天將細胞種在 實驗前一天將細胞種在 實驗前一天將細胞種在 相應的黑壁 相應的黑壁 相應的黑壁 96 或 384孔細胞板上 ：

1） 加入 BCECF，孵育 45 分鐘

2） 加入 20mM NH ₄Cl ，孵育 ，孵育 15 分鐘

3） 用含 20mM NH₄Cl 的緩沖液清洗細胞

4） 開始實驗

儀器設置

下表中FLIPR系統設置的參數適用于所有CHO細胞的BCECF實驗。