基本方案 FcY 受體介導的吞噬作用
材 料
原代巨噬細胞或巨噬細胞株（單 元 6.1 和 8. 5)
R P M I -5 完 全 培 養 基（或其他培養基）
綿 羊 紅 細 胞（S R B C ) ，用 Alsever 溶 液 I : I (V /V ) 稀 釋（附 錄 1)
生理鹽水： 0. 9 % (m /V ) NaCl
200?900 Ci/g N a 251CrO4 (30 000 Ci/m m o l ， ICN Biomedicals 或 DuPont N E N ) ，生理鹽水配制
多克隆抗 S R B C 抗 體（如 Diamedix) 或 抗 FcyRI 單 克 隆 IgG2a 型 抗 體（即調理素，雜交瘤 S.S-I ， A T C C )
A C K 裂解液
0.5% (m /V ) SDS 溶液
刺 激 劑（如 小 鼠 IFN-cx /卩；其他活化劑見單元 6.4)
8 道 移 液 器（如 Costar Octapette)
9 6 孔平底細胞培養板（Falcon 或 Costar)
7 液閃儀和 7 液閃管
15m l 和 50m l 錐底離心管
I E C 離 心 機（臨床型）
上 清 收 集 系 統（S C S ; Skatron)
1 . 制備巨噬細胞懸液，調整濃度至 2. 5 X IO6個細胞/m l 。用 8 道 移 液 器 在 9 6 孔平底培養板每孔中加入 l 〇〇 Ml 細胞懸液。各實驗組及對照組均設 3 復孔。置細胞培養箱中培養 直 至 細 胞 貼 壁（小鼠腹腔巨噬細胞需 4 h 以上，其他分化較差的巨噬細胞可能需更
長時間）。
2.加入相應的刺激劑，以刺激巨噬細胞 F c y R 的表達。 I 型干擾素，如 IFN-a 或 IFN-p，lOOU/m l ，作 用 48 h 后能顯著上調巨噬細胞 F c y R 的表達，可作陽性對照。單獨培養基處理組作為陰性對照。不同刺激劑調節 F c y R 表達的最適濃度需根據預實驗確定。
3 . 將 7 液閃管標記編號
輔 助 方 案 Fcyr 介導的黏附作用
材 料
附 加 材 料（其他材料見基本方案)
150m mol/L 碘 乙 酸（iodoacetic acid， I A A ; 新鮮配制，避光保存)
2 4 孔平底細胞培養板（Costar 或 Falcon)
振蕩器，培養板型
1 . 制備巨嗟細胞懸液，調整濃 度 至 8 X 105 個細胞/ml 。在 2 4 孔 板 中 加 入 500ul 細胞懸液 。各實驗組和對照組至少設 2 復孔。 2 4 孔板置細胞培養箱中培養待細胞貼壁后，加 入 刺 激 劑（見基本方案，步 驟 1 和 2)。
2 . 制備同位素標記且抗體調理的 S R B C (見基本方案，步 驟 4?7)。在 9.9 ml S R B C 懸液中加入 0. I m l l 50m mol/L 碘乙酸，抑制巨噬細胞吞噬功能。
3 . 將 IOOUl SR B C 上清加至含 S C S 的 7 液閃管中，讀 取 cp m 值（此值為巨噬細胞最大黏 附 cp m 值 的 1/5)。
4 . 吸棄巨噬細胞培養上清。加 入 500^1 碘乙酸處理后的 S R B C 懸 液 ，孵 育 I h 或合適的時 間（見基本方案，步 驟 10)。
5 . 輕輕吸棄未黏附的 S R B C 懸液。用 I m l 移液器沿孔壁緩慢加入 500ul 培養基洗滌細胞 ，避免吹起巨噬細胞。重復洗滌 3 次 ，充分洗去未黏附的 S R B C 。
注意：應在一塊 培 養 板 洗 滌 全 部 結 束 后 再 開 始 第 二 塊 培 養 板 的 洗 滌 。
6 . 加 人 500W 濃度 為 0 . 5 % 的 SD S， 輕搖培養板約 10 min，裂解巨噬細胞。
7 . 將 7 液閃管編號標記，加 入 S C S 濾紙。用 I m l 移 液 器 吸 取 400M1 巨噬細胞裂解液，小心加到相應的 7 液閃管中，用 7 液閃儀檢測 cp m 值 。
8.計算各樣品的平均值（見基本方案，步 驟 16?17)。結果以 S R B C 結合量表示時，應將 400ul 裂解液的 cp m 值 換 算 成 500ul 裂解液總量的 cp m 值。