| 實驗步驟 | 材料
無菌
培養細胞
生長液
0.25% 粗制胰蛋白酶
D-PBSA
3H-胸腺嘧啶脫氧核苷，2.0MBq/ml (約 50uCi/ml)，75 GBq/mmol (約 2Ci/mmol)
安全提示 處理 3H-胸腺嘧啶脫氧核苷時要謹慎， 因為它是放射活性物質和基因產物！要遵照當地指南操作（見 7.7 節）。
多孔培養板，內含 13 mmThermanox 蓋片（Nalge Nunc)
非無菌
血球計數板或電子計數器
D-PBSA
醋酸甲醇（1 份冰醋酸加入 3 份甲醇），冰冷，新鮮配制
顯微鏡載片
封膠（如 DPX 或 Permount)
三氯乙酸（TCA ),0.6mol/L ，冰冷
去離子水
甲醇
操作步驟
1. 在裝有蓋片的 24 孔培養板中，以 2X104～5X104 個/ml 培養細胞。
2. 待細胞貼壁，開始增殖（48～72 h) , 讓其達到所需要的細胞密度。
3. 在培養液中加入 3H -胸腺嘧啶脫氧核苷，100KBq/ml(約 5uCi/ml)，將細胞繼續培養 30 min 。
提示 某些培養基，例如 Ham’s F10 和 F12，它們含有胸腺嘧啶脫氧核苷 (表 9.3，10.1 和 10.2)，那么放射活性的胸腺嘧啶脫氧核苷的濃度要增加，這樣方能在培養液內達到相同的特異活性。
4. 除去標記液體，將它棄于專用的放射廢物容器中。
5. 用 D-PBSA 清洗蓋片 3 次。每沖洗一次，要從孔底部揭起蓋片（但不要超出該孔），以便使蓋片底部的同位素能沖掉。
6. 加人 1:1 的 D-PBSA : 醋酸甲醇，每孔 lml，然后立即吸去。
7. 每孔加人 lml 冰醋酸（4℃ )，靜止 l0 min。
8. 取出蓋片，用風扇吹干。
9. 將蓋片封固于顯微鏡載片上，細胞面朝上。
10. 讓封固膠過夜干燥。
11. 將載片放在含 0.6mol/L TCA 的染色缸中（4°C)，靜置 lO min，在此過程中更換 2 次 TCA，借此可除去未摻人的前體物。
12. 用去離子水淋洗，然后改用甲醇，晾干。
13. 準備放射自顯術（見方案 27.3. )。
14. 當放射自顯影進行一段曝光時間（通常 1～2 個星期），顯影，染色（見方案 27.3),40 倍顯微鏡下觀察。
15. 計數標記細胞的百分比。為了涵蓋代表區，按圖 21.14 所示進行掃描觀察。
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