4. 應激破壞了對BLA-plPFC互易谷氨酸能回路的2-AG抑制
在觀察到應激增加了BLA-plPFC相互回路內的突觸前釋放概率，以及進入plPFC的BLA輸入受到2-AG信號的高度調控后，研究人員接下來試圖確定應激誘導的突觸增強是否是由BLA-plPFC 2-AG信號的動態重構介導的。使用質譜，研究人員觀察到應激暴露24小時后降低了mPFC中2-AG的水平，這與之前在其他大腦區域的研究一致 (圖4A)。此外，在應激小鼠的mPFC中，花生四烯酸(AA)(2-AG水解的主要降解產物)的體積水平也顯著降低(圖4B)。這些數據表明，應激暴露可以下調mPFC中2-AG的合成，因為2-AG和AA的水平在應激暴露后都同樣降低；為了支持這一點，用MAGL抑制劑JZL184抑制2-AG水解增加了2-AG，減少了AA(圖4A和4B)。重要的是，用JZL184升高2-AG水平反轉，而用DO34降低2-AG水平會加劇EZM中應激誘導的焦慮樣行為的增加，支持2-AG信號可以雙向調節應激誘導的焦慮的概念(圖4C)。最后，研究人員發現JZL184的抗焦慮作用需要CB1受體的可用性。
研究人員接著驗證了這一假說，即應激誘導的BLA-plPFC相互回路的加強是由2-AG介導的對BLA-plPFC谷氨酸能傳遞的抑制崩潰所介導的。研究人員再次發現，應激使L2/3rAAV+神經元選擇性地增加突觸前釋放概率，表現為應激后24小時的PPR降低(圖4D和4E)。有趣的是，盡管沐浴應用DO34降低了非應激小鼠的PPR，但這種作用在應激動物中被阻斷了。此外，DO34的應用阻斷了應力誘導的PPR的進一步降低。相反，在BLA-L2/3rAAV+突觸應用JZL184對2-AG信號的藥理增強能夠以CB1依賴的方式選擇性地挽救這種應激誘導的PPR下降(圖4E和S5A)。在BLA-L2/3rAAV+突觸中，2-AG信號的藥理增強能夠選擇性地挽救這種應激誘導的PPR下降(圖4E和S5A)。最后，在2-AG時相信號方面也觀察到了類似的模式，因為應激降低了L2/3rAAV+神經元的DSE幅度，這種效應可以通過JZL184孵育而得到挽救(圖4F和4G)，這種效應依賴于應激源的強度，并在應激暴露后3天恢復。根據PPR觀察，預先應用利莫那班可以阻斷JZL184對DSE的影響。L2/3rAAV_神經元(圖4H-4K)和L5神經元(數據未顯示)未觀察到應激誘導的變化。這些數據表明，應激誘導的BLA-plPFC突觸的相位和強直2-AG信號的崩潰可能有助于應激誘導的BLA-plPFC電路的加強和隨后焦慮樣行為的表達(圖4L)。有趣的是，雌性小鼠沒有表現出應激誘導的DSE幅度的降低，這表明應激對強直性和相性2-AG信號的影響可能在性別之間有所不同。然而，DSE在2MT暴露時受損，表明2-AG信號崩潰不是應激源特有的。為了進一步支持應激誘導的2-AG-CB1對BLA興奮性輸入的調節功能崩潰，研究人員證明了應激阻斷了利莫那班和NESS增加OEPSC幅度的能力，完全阻斷了NESS降低PPR的能力，同時部分阻斷了利莫那班降低BLA-L2/3plPFC rAAV+突觸PPR的能力。
最后，研究人員的質譜數據顯示，應激暴露后mPFC的AEA水平也降低(圖S5D)。這暗示了壓力也可能損害BLA-plPFC電路的AEA調節。然而，與AEA降解抑制劑PF3845孵育，既不影響基礎PPR，也不挽救應激誘導的PPR或DSE幅度的下降，表明AEA不強烈調節BLA-plPFC谷氨酸能傳遞。此外，應激暴露不影響大麻素激動劑誘導的BLA-L2/3plPFC突觸的突觸抑制，這表明應激損害了2-AG水平，而不是影響CB1受體的敏感性。
