衛生部近日匯總公布了《食品中可能違法添加的非食用物質和易濫用的食品添加劑品種名單》，上海月旭公司從公布的黑名單中統計發現，包括三聚氰胺、蘇丹紅、孔雀石綠、人工合成色素等都在內。針對這些令人觸目驚心的食品添加劑，同時也為食品安全檢查和監管工作提供有力的技術支持和保障，上海月旭公司迅速組織相關人員研制出了方便、快速、準確的檢測方法，現將LC-MS/MS檢測動物組織中β-興奮劑類藥物的方法公布如下：
1. 適用范圍
適用于動物組織中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺藥物的檢測。
2. 提取
將5g動物組織、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸鈉溶液置于50 mL離心管中，10000 rpm均質2 min。6000 rpm下離心2 min，將上清液轉至另一離心管中。用15 mL乙酸乙酯重復提取一次，合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的鹽酸溶液，渦動1 min，然后再6000 rpm下離心1 min，收集下層水相。重復萃取一次，合并下層水相，用2.5 mol/L NaOH溶液調節pH至5.2，待凈化。
3. 凈化
活化/平衡：依次向Welchrom? P-SCX（60mg/3mL）（上海月旭提供）中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L鹽酸溶液，流出液棄去；
上樣：將上述提取液加入柱中，流出液棄去；
淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液棄去，并將小柱抽干；
洗脫：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，40℃下氮氣吹，50%乙腈復溶，過0.22μm濾膜，待分析；
4. 色譜質譜條件
4.1 色譜條件
色譜柱：Ultimate XB-C18 液相色譜柱（2.1mm* 100 mm, 3 μm）（上海月旭提供）
時間（min） | 流動相A（%） | 流動相B（%） |
0 | 95 | 5 |
3 | 95 | 5 |
5 | 45 | 55 |
10 | 45 | 55 |
10.1 | 95 | 5 |
15.0 | 95 | 5 |
流動相：
A：0.1%甲酸水溶液
B：乙腈
梯度洗脫
流速：0.2 mL/min
進樣量： 10 μL
柱溫：35 °C
運行時間：12 min
4.2 質譜條件
掃描模式：MRM
離子源：ESI+
毛細管電離電壓：3.20 Kv
孔電壓（cone）：45 V
電離源溫度：100 ℃
脫溶劑溫度：300 ℃
錐孔氣流速：50 L/Hr
脫溶劑氣流速：450 L/Hr
名稱 | 母離子 | 子離子 | 孔電壓(V) | 碰撞電壓(eV) | 駐留時間（ms） | 定量離子對 | 定性離子對 |
鹽酸克倫特羅 | 277.2 | 167.8 | 20 | 28 | 100 | - | + |
203.0 | 20 | 16 | 200 | + | - | ||
萊克多巴胺 | 302.17 | 106.8 | 18 | 28 | 100 | - | + |
164.1 | 18 | 14 | 200 | + | - | ||
鹽酸克倫特羅-D9 | 288.2 | 209.2 | 22 | 146 | 100 | + | |
萊克多巴胺-D3 | 305.2 | 167.1 | 18 | 14 | 100 | + |
5. 結果
回收率和重現性實驗
將豬肌肉空白樣品經過液液萃取初步處理后，分別添加一定量的標準溶液，添加濃度分別為0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次內同一濃度做3次平行實驗，共3個批次。
添加水平（μg/kg） | ||||||
分析物 | 0.1 | 0.5 | 1.0 | |||
Recovery (%) | RSD (%) | Recovery (%) | RSD (%) | Recovery (%) | RSD (%) | |
鹽酸克倫特羅 | 93.8 | 5.82 | 89.7 | 5.92 | 96.1 | 3.62 |
萊克多巴胺 | 95.3 | 7.43 | 103.5 | 3.42 | 97.4 | 4.55 |