LSCM樣品制備中相關實驗方法

樣品制備中相關實驗方法

用于免疫熒光抗體標記組織切片的載玻片需經過明膠、蛋白膠、多聚賴氨酸 ( Poly-L-Lysine)、硅烷(3-氨丙基三乙氧基硅烷，APES) 等處理，以粘貼組織切片，防止組織切片在免疫反應過程中脫落。簡易明膠處理方法是將干凈的載玻片浸于 0.1% 明膠熱溶液中一分鐘，取出瀝干，65 ℃ 烘烤 1h，放至室溫即可使用。0. 5% 明膠 - 硫酸鉻鉀處理方法是溶解4g 明膠和4g 硫酸鉻鉀于 800 mL d2H2O 中，65℃加熱30 min 左右，使其溶解(不要使溶液沸騰)后，過濾溶液，并將溶液在室溫下放置至 50 ℃ 左右，將玻片在溶液中浸提 3~4 次，在室溫下過夜使其蒸發干，為防止灰塵，用保鮮膜覆蓋，130 ℃ 烤干 3 h 以上，干燥保存備用。處理液使用后，可加入 0. 05% NaN3 ，4 ℃ 保存，下次處理載玻片時將溶液加熱至50 ℃ 即可。大量處理過的載玻片，可以收集于載玻片盒中，放在干燥箱中長期保存。蛋白膠處理方法簡便易行，多用于樣品量不多的情況，取新鮮雞蛋清充分攪拌，4 ℃ 過濾，清液加入等體積無熒光甘油，再加入 0. 05% NaN3 充分混合，分裝成每管 1 mL，- 20℃ 保存，使用時室溫融化，取少量蛋白膠均勻涂抹在干凈的載玻片上，40℃烘干，放至室溫即可使用。目前國內可以采購到明膠、多聚賴氨酸、硅烷等處理過的載玻片，大大節省了樣品制備的準備時間。