LSCM綠色熒光融合蛋白表達載體的構建

綠色熒光融合蛋白表達載體的構建

綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP) 及其突變體能在各種不同的生物系統中表達，這對細胞生物學的研究具有重要意義。而熒光蛋白的折疊能力及其同細胞內蛋白的融合能力，使研究 者能直接在細胞體內觀察到蛋白質的特性。研究者不需要把蛋白質經過純化、標記并再轉移到細胞體 內的過程，可直接在細胞水平，甚至是整個動物體水平上觀察。當研究者沒有合適識別目的蛋白的抗體 時，在細胞內表達綠色熒光融合蛋白不失為一種快捷和合適的研究手段。

熒光蛋白的構建使用標準的分子生物學技術。通過 PCR 擴增目的蛋白的 cDNA，接入到熒光蛋白表達載體的多克隆位點。載體的構建方法和過程參考《分子克隆實驗指南(第三版)》。在設計熒光融合蛋白前，研究者應考慮熒光融合蛋白的用途，使用何種熒光蛋白，及熒光蛋白插入的位置(N 端、C端或定位信號序列之后)。