| 實驗步驟 |
通過以下步驟實現:在飛行器未端放置的反射器上施加高電壓，其電壓值比離子源的電壓值稍高，進入反射器的離子在電場作用下方向偏轉，直至停止飛行，然后在反射器內被賦新加速飛出反射器進入第二檢測器(Ill 5. lb) 。反射器充當了一個能量聚焦裝置，因為動能稍小的離子（速度慢），進入反射器的距離短，折返也較早，動能稍大的離子進入反射甜的距離長，折返較晚，所以速度慢的離子趕上速度快的離子，反射器的應用減少了離子初始動能的分散，因此提高了質量分辯率,第二種用來修止 MALDI 離子化過程中初始能景分散的技術是在離子源內實現的，由 Wiley 和 McLacen 在 1953 年提出, 稱為時間延遲聚焦, 最近被稱為延遲提取 (delayed extraction)在圖 5. lb 和 c 中村到，相對于連續離于提取（圖 5, la), 延遲提取是在樣品靶和接地的連續離子提取透鏡之間又加了二級離子透鏡（施加電壓），延遲提取時，MALDI 在無電場區域產生離子，在施加提取電壓使離子加速進入飛行管道之前，離子可以四處分散今這樣顯著降低了離子的能低分散，同時也限制了峰的展寬，峰的展寬通常是由于在連續離子提取模式下源內離子碰撞產生不穩定的解離所致也延遲提取使線性 MALDI 質譜儀分析多肽的質量分辨率達到 2000-4000, 便反射 MALDI 質譜儀分析多肽的質量分辨率達到 3000-6000 。 
PSD-MALDI-MS 為了在MALDI-MS儀器上獲取一級結構信包，必須選擇分析某一離子及其碎片離子的質量 這一過程發生在源內離子化之后，所以被稱為源后衰變 (post source decay, PSD) 。對多肽進行 PSD 分析時，其碎片離子主要是沿多肽骨架斷裂形成，產生的一系列碎片離子在理論上包含若這－肽段的氨基序列信息，離子源內產生的離子被加速后在飛行過程中產生的碎片離子是亞穩離子， 所有的碎片離子都具有與其前體離子相同的速度，但只具有前體離子動能的一部分分。所有的離子, 包括前體離子和碎片離子，由于具有相同的表觀質荷比，都將在同一時間到達線性檢測器，所以在線性 TOF 分析器中，不能分辨碎片離子與前體離子但是使用離了鏡（反射器）可以分辨碎片離子與前體離子的動能差異，現在有兩種反射器 雙程 (dual-stage) 反射器和環場 (curved-field) 反射器，雙程反射器只能在有限的動能范圍內聚焦離子，為了使較寬動能范圍的離子都被聚集，反射器電壓要逐步減少，連續降 7 -14 步，聚焦動能越來越小的離子，收集到最后一張譜圖時，反射器電壓大致是初始電壓的 5% -10% 。由數據系統整合出連續完整的碎片離子譜圖，并根據每一反射電壓下的碎片離子校正譜圖進行校正，環場反射器能在一次試驗中分辨出所有的碎片離子。環場反射器是由一系列電壓逐漸減小的離子透鏡組成的長反射器（圖 5.k), 因此聚焦不同質荷比的碎片離子所需的電壓一直存在，但是在空間上是可以分辨的。在同，激光脈沖下如果產生多個肽段離子，在沒有質量過濾器時，不能區分不同肽段產生的碎片離子，也不能區分碎片離了與未斷裂的肽段離子。因此，裝備有以上任一種反射器的質譜儀都安裝了一個離子門 (ion gate), 可以在低分辨率情況下（± 2.5%) （圖 5, lb 、 c) 選擇前體離子／碎片離子。所以，在一個未經分離的肽混合物中，可以選擇多個肽段得到其序列特異的碎片離子信息。 展開 |
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