1.將38克培養基（或上面列出的組分）懸浮在1升純凈水中。
2.徹底混合。
3.經常攪拌加熱并煮沸1分鐘以完全溶解組分。
4.在121℃下高壓滅菌15分鐘。
5.冷卻至45°C
6.將冷卻的Mueller Hinton Agar倒入水平的水平表面上的無菌培養皿中，以獲得均勻的深度。
（注意：必須將板傾倒至4毫米的深度（對于100毫米板，大約25毫升液體瓊脂，對于150毫米板，大約60毫升液體瓊脂，但在任何情況下，測量深度為4毫米）。太淺的平板會產生錯誤的敏感結果，因為抗微生物化合物將比它應該進一步擴散，產生更大的抑制區。相反，澆注到> 4 mm深度的板將導致抗假結果。）
7.在室溫下固化。
8.檢查制備的Mueller Hinton瓊脂，確保最終pH值在25°C時為7.3±1。
（注意：如果pH值<7.2，某些藥物似乎會失去效力（氨基糖苷類，喹諾酮類，大環內酯類），而其他藥物似乎有過量活性（四環素）。如果pH> 7.4，則可能發生相反的結果。）
9.準備好的介質可以在4到8°C的溫度下儲存。Mueller-Hinton瓊脂從制備之日起約70天穩定。
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