一、材料準備
1. 靶細胞制備
（1）取傳代培養24~28小時對數生長期的YAC-1細胞，用RPMI-1640培養液洗滌2次1000 r/min 離心5分鐘。
（2）10%FCS-RPMI-1640培養液重懸細胞，并用0.5%臺盼藍染色檢測細胞存活大于95%，調整細胞濃度至1×105/ ml。
2. 效應細胞制備
（1）將小鼠頸椎脫位處死，用酒精棉球消毒腹部，剪開腹部皮膚和腹膜，無菌取脾臟，出去脂肪膜等，放入加有約5 ml PBS液的平皿中，用5 ml 注射器抽取平皿內液體緩緩注入脾臟內，將脾細胞沖洗出來。
（2）如此反復沖洗，直到脾臟變白為止（約沖洗5~6次），將細胞移入離心管內，離心洗1次，1000 r/min 離心5~10分鐘，重復洗1次，用10%FCS-RPMI-1640培養液重懸細胞，計數細胞，并調細胞濃度至1×107 /ml。
二、操作步驟
1. 孵育：取效應細胞和靶細胞各0.1 ml（E：T＝100：1）加入細胞培養板中，設3復孔，同時設靶細胞自然釋放孔（0.1 ml 靶細胞+0.1 ml 10%FCS-RPMI-1640培養液）和最大釋放孔（0.1 ml 靶細胞+0.1 ml1%NP40液），1000 r/min，低速離心2分鐘。置37℃，5%CO2孵育2小時。1000 r/min，離心5分鐘。
2. 測定：吸取各孔上清0.1 ml 加至新96孔板中，37℃，10分鐘。每孔再加入0.1 ml 新配制的LDH底物溶液，室溫避光反應10~15分鐘。加入30 μl 1 mol/L 枸櫞酸終止液終止酶促反映。酶聯監測儀在570 nm波長下讀各孔A值。
3. 計算：根據下列公式計算NK細胞活性
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