NatureMethods：抗體驗證指南首次出爐

　　據估計，因抗體質量不佳，生命科學領域每年的損失達到8億美元。同時，這也造成了無數的實驗失敗，浪費了寶貴的樣本和科學家的青春。盡管科學界已經意識到這個問題，但目前仍然缺乏抗體驗證的整體框架。

　　為了刺激研究界實現更高標準的抗體重復性，國際抗體驗證工作組（IWGAV）近日出臺了一套指南。這些指南發表在9月5日的《Nature Methods》雜志上，強調了抗體驗證需要針對應用和背景來開展。

　　這篇題為“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的數名成員發表的，包括工作組主席、瑞典皇家理工學院的微生物學教授Mathias Uhlén。文章提出了五點，以指導特定應用中的抗體驗證。

　　? 遺傳策略：測定對照細胞或組織中的相關信號，這些對照中的目標基因已利用CRISPR或RNAi等技術敲除或敲低。

　　? 正交策略：利用不依賴抗體的方法定量多個樣品，然后檢查依賴抗體和不依賴抗體這兩種定量之間的相關性。

　　? 獨立抗體策略：利用兩個或更多的獨立抗體來識別目標蛋白上的不同表位，再通過比較和定量分析來確認特異性。

　　? 表達標記蛋白：修飾內源的目標基因，增加親和標簽或熒光蛋白的序列。標記蛋白的信號可與基于抗體的檢測相關聯。

　　? 免疫捕獲加上質譜分析：將免疫捕獲與MS分析相結合，以確定與純化的抗體直接作用的蛋白質，以及可能與目標蛋白形成復合物的蛋白質。

　　這篇文章還對生產商和使用者提出建議，以確保長期的抗體重復性。作者們建議使用者在自己特定的應用或樣品中，至少運用上面的一種策略來開展驗證。同時，他們還建議使用者按照一定的形式報告，包含貨號、批號和RRID（研究資源標識符），以確保研究中使用的任何抗體可被明確識別。

　　同時，作者們也向生產商提出了類似的建議，至少運用一種策略來驗證，并提供盡可能多的抗體信息，如鑒定檢測中的抗體濃度、細胞提取物的濃度、抗體生產所用的免疫原、抗體-表位的親和力、緩沖液配方等。

　　“這篇文章邁出了重要的第一步，有望制定出廣泛接受的抗體驗證標準，確保生命醫學研究使用高質量且一致的抗體，”Uhlén博士表示。“我們期待抗體用戶、出版商、資助機構和生產商的反饋，以幫助加強這個初步建議，并確保這些基本工具的可靠性。”

　　在文章發布之后，抗體生產商之一 – 賽默飛世爾公司承諾，它將按照IWGAV的建議來驗證其抗體的特異性。賽默飛表示，它將很好地遵循這個指南，并借助其領先的質譜、CRISPR和siRNA平臺來開展驗證。此外，對于通過新標準的抗體，公司會在網站上標注，以表示它通過特異性檢測。

　　賽默飛世爾的生命科學部門總裁Peter Silvester表示：“賽默飛世爾很高興看到國際抗體驗證工作組的第一個建議。我們相信，這些標準將有助于對抗用戶在使用這些關鍵工具時面臨的挑戰。我們承諾按照IWGAV的標準來測試我們的抗體，這證明了我們對科學的承諾，以及我們提供特異抗體的使命。”