A．質粒DNA的小量提取
試劑及其配制
含AP的LB液體培養基
TE緩沖液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)
1mmol/L EDTA (pH 8.0)
溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)
10mmol/L EDTA
50mmol/L 葡萄糖
高壓滅菌15min.后，4℃貯存。
溶液II: 0.2mol/L NaOH
1% SDS（臨用前現配制）
溶液III（100ml）：5mol/L 乙酸鉀 60ml
冰乙酸 11.5ml
dH2O 28.5ml
4℃貯存。
酚∶氯仿（1∶1）
95%和70%乙醇
試驗程序
1．在純凈工作臺上將5ml含AP的LB液體培養基加入到一10~15ml通氣良好的試管中，然后將前述經鑒定含有目的DNA片斷的轉化細菌接種其中，37℃下振蕩培養過夜。
2．取1.5ml培養物置于一微量離心管中，在4℃下12000rpm離心2min.，棄去上清液，使細菌沉淀盡可能干燥。
3．將細菌沉淀重懸于100μl溶液I中，劇烈振蕩后加入200μl新配制的溶液II，蓋緊離心管口，將其快速顛倒5次（切勿振蕩），再加入150μl在冰上預冷的溶液III，蓋緊離心管口，將其倒置后輕輕地振蕩使溶液III在粘稠的裂解物中分散均勻，再將離心管置于冰上3~5min.。
4．在4℃下12000rpm離心5min.，將上清液移至另一離心管中。
5．加入等量酚∶氯仿（1∶1），振蕩混勻，在4℃下12000rpm離心2min.，將上清液轉入另一離心管中。
6．加入二倍體積95%乙醇，振蕩混勻，室溫放置20min.，在4℃下12000rpm離心5min.，小心棄去上清液，倒置將液滴除盡。
7．用70%乙醇洗滌一次，室溫干燥10min.，用50μl含20μg/ml胰RNA酶（無DNA酶）的TE重新溶解質粒DNA，取1μl 在含溴化乙錠的微型膠上進行電泳檢測，其余置于-20℃保存備用。
B． 質粒DNA的線性化
試劑及其配制
Not I和Sal I內切酶及其相應的緩沖液
酚∶氯仿（1∶1）
3mol/L NaAc(pH 5.2)
100%和70% 乙醇
DEPC-H2O
試驗程序
1．在離心管中依次加入：質粒DNA 10μl (1μg/μl)
10×內切酶緩沖液 10μl
dH2O 80μl
Sal I或Not I 2μl(10U/μl)