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  • 發布時間:2021-06-23 16:49 原文鏈接: PCR實驗室最容易忽視的環節(二)

    3.濾芯吸頭


    測試吸頭需使用經校準的移液器

    (1)準確性:將n個吸頭分別吸取定量的純水稱重,重量與體積的關系按照1 g/mL換算。

    (2)氣密性:取n個吸頭,吸取最大量程的含有1%甘油的墨水,觀察有色液體不出現在濾塞之上,液面相同為合格。

    (3)防氣溶膠性能:取n個吸頭,吸取陽性核酸,反復吹吸10次,換另一個新吸頭在陰性純水中反復吹吸10次,取陰性純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (4)污染物質檢:取n個吸頭,吸取陰性純水反復吹吸10次,取陰性純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (5)抑制物質檢:取n個吸頭,吸取弱陽性質控物反復吹吸10次,然后進行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反復吹吸10次,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。


    4.采血管、采樣管、采樣拭子和一次性吸管等


    主要考察污染物和抑制物

    (1)污染物質檢:將n個耗材加入一定量陰性純水,蓋好蓋子渦旋1 min后靜置30min,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (2)抑制物質檢:將n個耗材分別加入弱陽性質控物,室溫靜置30min,然后吸取質控物進行提取;作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。


    5.無核酸酶水、PBS等緩沖液


    (1)PH值:測量各緩沖液的PH值。

    (2)污染物質檢:吸取緩沖液作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (3)抑制物質檢:將緩沖液分別與RNA核酸和DNA核酸混合,然后吸取混合液作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。


    6.移液器和離心管架及離心機的內外表面


    這些常見物品的外表面容易被核酸和細菌污染,主要查看這兩個指標。

    (1)表面核酸污染:用沾濕的拭子擦拭上述物品的外表面,然后浸泡到純水中10min,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (2)移液器內腔核酸污染:對于常用的移液器的內部,可使用無濾芯的吸頭在陰性純水中吹吸10次后,吸取純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

    (3)表明細菌污染:用沾濕的無菌拭子擦拭上述物品的外表面,劃瓊脂平板,每個平板的菌落數不應超過一定數量(我也不確定多少合適,由于不要求無菌操作一定會有細菌,但是也不應該太多)。


        

    非瘟和新冠后全國一下子新增了很多核酸檢測實驗室,早期大家關注的點都在設施和硬件上,但是一個檢測實驗室開展大量檢測工作之后,檢測中最弱的環節決定檢測的質量。我們也需要將精力放在檢測中的每個細節上。




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