污染原因:
1)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染。
2) PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.)PCR擴增產物污染:這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大(一般為1013 拷貝/ml),遠遠高于PCR 檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可造成假陽就可形成假陽性。
4)容易忽視,最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000 拷貝,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。
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