在眾多的生物實驗室中,分子生物學檢測方法如PCR因其檢測靈敏度高、準確度好、操作方便、快速等優勢已經被廣泛應用。不過正是由于它的高靈敏性,實驗室中極微量的污染源都有可能導致檢測結果的假陽性,所以對環境中污染源的防控也極為重要。一旦出現實驗室環境污染,比如樣本之間交叉污染、試劑污染、儀器污染、陽性對照污染、PCR擴增產物污染、氣溶膠污染等,其中氣溶膠污染是一個非常重要而被忽視的污染源。實驗室出現氣溶膠污染,需要較長的時間進行根除。
1、樣本之間交叉污染。
標本污染主要有收集標本的容器被污染;標本存放運輸時,由于密封不嚴或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;核酸模板在提取過程中,由于加樣槍污染導致標本間污染;手動提取核酸樣本時,污染的手套觸摸離心管內蓋導致的污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染。
2、PCR試劑污染
PCR試劑在配制過程中,移液槍、槍頭、離心管等原因造成試劑被PCR核酸模板污染。
3、不同工作區域移液槍等耗材交叉使用。
將易污染區域的移液槍、槍頭、離心管等耗材拿到潔凈區使用引起的污染;
4、離心機轉子未定期擦拭。
離心機通常進行各種試劑組分、不同盲樣的離心,如果離心管外部沾染病毒、陽性核酸或陽性質粒,容易造成污染。
5、陽性對照造成的污染。
開蓋時間過長高濃度質粒揮發到室內,陽性對照組分未使用完任意丟棄,加完陽性對照的槍頭未放入消毒液中。
6、擴增產物開蓋造成的污染。
這是PCR試驗中最主要、最常見的污染原因。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測拷貝的極限,PCR產物開蓋后,極易迅速造成擴散,極微量的PCR產物污染,就可形成假陽性。
7、各個實驗室擦桌布、掃把,簸箕,工作服交叉使用。