PCR實驗室設計要求

一、PCR實驗室平面布局

PCR實驗室布局圖

PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區域：試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配置和擴增區、擴增產物分析區，為了避免交叉污染，進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區，各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。

二、實驗室空調通風系統設計及壓力控制

實驗室空調通風系統

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性，適合用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證實驗區的壓力要求。

二、1 實際貯存和準備區

PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝盒主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送到這個區，不得經過其他區域。試劑原料必須貯存在本區內，并再本區內制備成所需的貯存試劑。該區對與氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。

二、2 標本制備區

該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入值擴增反應管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為：相對領巾區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染，另外由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的走動。

二、3 擴增反應混合物配制和擴增區

該區域主要進行的操作為DNA擴增，此外，已制備的DNA模板（來自樣本制備區）的加入和主反應混合液（來自試劑貯存和制備區）制備成反應混合液等也可以在本區內進行。本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的布必要走動，個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。

二、4 擴增產物分析區

該區域主要進行的操作為擴增片段的測定，本區是zui主要的擴增產物污染來源，因此對本區的壓力梯度要求為相對鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其他區域。

三、污染的預防與控制

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染，在試劑工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。一旦發生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需要重新進行實驗，所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應該是預防，而不是排除。

三、1 工作區域的嚴格劃分

1、各個實驗區域設置合理；

2、各個實驗區域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同顏色的地面等等），以避免各個不同實驗區域設備物品、試劑等發生混淆。

三、2 合理的系統設置

1、合理的空調通風系統設置，盡量采用全送全排的空調系統；

2、嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

三、3 規范的操作

1、擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓，經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

2、在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效防止污染的措施；

3、清潔工作及時、正確。實驗工作結束后，必須立即對本區進行清潔。除了常規的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外燈的消毒外，對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。

三、4 嚴格的管理

1、嚴格控制進出實驗室的人員，與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門；

2、盡量減少在實驗區內不必要的走動以及減少交叉污染的可能；

3、擴增產物分析區是zui主要的擴增產物污染來源，廢液不能再實驗室中傾倒，必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應該經過消毒液浸泡后統一處理，如焚燒等；

4、擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質，應特別注意實驗室人員的安全防護；

三、5 完善的實驗室配套設備

完備的實驗室設施是保證實驗工作的必要條件，應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺，離心機。加樣器等等。