實驗臺擺放規范
1.目的：使實驗操作過程達到最優，保證檢測工作的正常進行。
2.適用范圍：核酸擴增熒光檢測實驗室中用來處理樣品的實驗臺及置于其上的實驗用具，包括移液器架、標本架、吸頭盒、離心管架等物品。
3.職責：本室工作人員應自覺遵守，由實驗室負責人監督執行。
4.擺放規范：核酸擴增熒光檢測實驗室中用來處理樣品的實驗臺上各種物品的擺放必須遵照一定的規則(如下圖)。實驗物品須排放整齊，實驗過程中不宜隨意移動，要區分相對潔凈區和相對污染區。
4.1 做實驗前實驗臺面的擺放應如圖1所示
說明：移液器架上從左到右放200～1000 l、20～200 l、5～50 l、0.5～10 l的移液器；移液器架左邊擺放離心管架和棄液缸，是相對污染區；槍架右邊擺放常用實驗試劑（ 如生理鹽水、NaOH等）和槍頭盒，是相對潔凈區。
4.2 做實驗時實驗臺面的擺放應如圖2所示
說明：做實驗時，槍頭盒放置槍架旁；棄液缸移至右手易打掉槍頭的位置 （注意與吸頭盒和移液器架隔開一定的距離，實驗后其擺放位置用75%酒精擦拭）；標本在正前方處理。
核酸擴增及產物分析檢測的操作程序
1.目的：PCR檢測是整個臨床基因擴增檢驗最主要的過程，為使該過程有序、
在控，特制訂本程序。
2.范圍：PCR檢測---樣本處理、核酸提取、純化、擴增產物分析整個過程。
3.職責：本程序由PCR實驗室工作人員負責執行。
4.工作流程：
4.1 核酸提取、純化、擴增、產物分析的具體操作見項目SOP文件及儀器使用
SOP文件。
注：目前，SOP文件的主要依據是生產廠家提供的檢測試劑盒說明書。
4.2 核酸提取、純化在標本制備區完成。
4.3 在二區處理好的模板放入4℃冰箱保存。
4.4 擴增反應體系的配制、分裝在試劑準備區完成后，由傳遞窗樣本處理區，添
加模板后，將處理后的標本放入通往三區的傳遞窗。
4.5 擴增程序的編程：日常檢測活動中，操作者必須遵循儀器使用SOP文件規定
的路徑。編程或修改路徑參照儀器說明書。
4.6 標本標識的傳遞：以標本唯一性標識中的“序號”作為檢測過程中的“檢驗
號”進行傳遞。
4.6.1 試管或其它蓋體分離的容器，檢驗號標識于管身上1/3處。
4.6.2 對于0.5ml, 1.0ml Eppendoff管，檢驗號標識于管蓋。
4.6.3 擴增使用的薄壁管不能做任何標識，檢驗號由試管架上的標識傳遞到擴增
儀轉輪標識號上，并且一一對應。
4.7 工作安排：每一項目每周至少完成一個批次的檢測。
4.8 在移取所需體積的血清及痰液后，立即蓋緊原始標本管蓋，將標本繼續保存
于與原來對應的條件下保存。
4.8.1原始標本保存一周后丟棄,因此申明“如果病人對結果有疑義請在一周內提出,以便及時核查”。
4.8.2如患者及醫生對標本結果有異議，則需在一周內及時提出意見，以便重新
檢測復核結果。
5.引用的文件：
乙型肝炎病毒（HBV）核酸擴增（PCR）熒光定量檢測標準操作程序
乙型肝炎病毒核酸擴增熒光定量檢測標準
操作程序
1.目的：明確乙肝病毒核酸定量檢測的操作規程，指導檢驗人員正確進行乙肝病毒核酸定量的檢測。
2.適用范圍：
2.1適用于進行乙肝病毒核酸定量檢測的檢驗人員。
2.2適合儀器：LightCycler型核酸擴增熒光檢測儀
2.3方法原理：采用PCR方法結合熒光探針的擴增技術
2.4樣品要求：血清
3.職責：實驗操作人員應嚴格按操作規程進行實驗。
4.試劑來源：中山大學達安基因股份有限公司HBV DNA熒光PCR檢測試劑盒。
5.質控物：陰性、陽性對照及陽性參控品系列均來源于試劑盒
6.標準操作：
6.1 試劑準備（在試劑準備區操作）
6.1.1將試劑盒及其它所需試劑置室溫解凍（Taq酶為液態試劑，臨用前取出，用后立即放回冰格），完全融解后混勻。
6.1.2根據當次實驗標本量，取出相應試劑總的需求量于一管中（其余隨即放回原溫度保存），如所需要的管數為n (n=標本數+1管陰性對照+1管陽性對照+1管臨界陽性對照+4管陽性參控品)（定性檢測無需做陽性參控品）， 取PCR反應管，轉移至樣本制備區。
6.2 樣本制備及加樣（在標本制備區操作）
6.2.1
取血清標本40ul，或陰陽性對照標準品各10ul（強陽性標準品使用前加入稀釋液90ul混勻），加等量DNA提取液打勻，（提取液內含不溶于水的物質，取樣時需用加樣器充分混勻后吸取。如出現因吸頭嘴部太細不能吸取或取樣后填滿吸頭的現象，可先用潔凈無污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截）。沸水浴10分鐘，轉至4℃靜置8-12小時以保證病毒顆粒充分裂解。
6.2.2 10000rpm離心5分鐘，取上清液2ul直接加入到PCR反應管中，6000rpm離心數秒。
6.2.3 將各反應管帶入PCR儀。
6.3 PCR擴增（在擴增區操作）
按儀器使用說明或標準操作程序操作。
擴增條件如下：93℃→2分鐘預變性
93℃ 30秒 → 55℃ 60秒（40個循