利用PCR技術，只需增加一步逆轉錄反應，便可從少數mRNA的構建cDNA文庫，以mRNA為模板，以oligo（dT）為引物，在依賴于RNA 的DNA聚合酶催化下體外合成cDNA第一鏈之后，可通過PCR擴增此鏈。
如在此鏈的3'端再加上一段鳥苷酸殘基同聚物，則可以使用oligo（dT）和oligo（dC）作為后續PCR擴增的引物，也可酌情在這些引物的5'端加上限制性酶切點，以利于將所得的雙鏈DNA克隆到適當的載體中。
在某些情況下，如已知RNA（或其基因）兩端的核苷酸序列，mRNA5'端核苷酸序列或其編碼的蛋白質N端的氨基酸序列，便可設計特定的兩端引物，用于直接克隆特定的目的基因cDNA，從而省略從cDNA文庫中篩選cDNA克隆等序列費時的操作。