（1）加樣/稀釋誤差: 使得標準品不呈梯度。
（2）標準品出現降解: 應避免標準品反復凍融，或重新制備并稀釋標準品。
（3）引物或探針不佳: 重新設計更好的引物和探針。
（4）模板中存在抑制物，或模板濃度過高
