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  • 發布時間:2022-01-29 12:14 原文鏈接: PCR污染問題怎么監測和預防

    這兩天正好看到一個“2012年全國公安司法及血液中心標準DNA實驗室裝備展覽會”的宣傳文章說這個問題,復制來給你看看吧。

    PCR室污染監測及防御

    2012年全國司法及血液中心國際標準DNA實驗室觀摩會將在明年6月于青島國際會展中心舉行,這次觀摩會秉著打造全球頂尖展會的理念,將展示具有世界一流水平,符合國際標準的DNA實驗室樣板間。并將在展示過程中向參會人員免費發放實驗室解決方案,本文就是日前由組委會展示的該系列方案中的一部分。

    PCR反應最大的魅力是擴增力能與高靈敏度,但易污染一直是困擾各實驗室的大問題,極微量的污染就可能造成假陽性反應,破壞試驗結果。如何監測與防止PCR污染,是現在各實驗室的重要課題。
    一、污染監測
    一個好的PCR實驗室,必須要時刻注意污染的監測,考慮是否受到污染,如有污染,是何原因造成的。通過有效地監測,采取正確的相應措施,防止或消除污染。
    對照試驗是監測PCR污染的重要手段。
    1、陰性對照:陰性對照是每次PCR實驗都必須做的。它包括了標本對照與試劑對照,通過對照確認樣本和試劑是否受到感染。
    2、陽性對照:它是PCR 反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性對照要選擇擴增度中等、重復性好、經鑒定是該產物的標本。但陽性對照其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大。因而當某一PCR試劑已經使用穩定,檢驗人員完全掌握時,在之后的實驗中應盡可能免設陽性對照。來減小污染概率。
    3、選擇不同區域的引物進行PCR擴增。
    4、重復性試驗。
    二、防止污染的方法
    1、合理分隔實驗室:將樣品的處理、配制PCR反應液、PCR循環擴增以及PCR產物的鑒定等步驟進行分區或者分室,尤其要將樣本處理和PCR產物的鑒定與其它步驟嚴格分開。 理想的分區為,標本處理區、PCR反應液制備區、PCR循環擴增區、PCR產物鑒定區。
    2、PCR試劑要做好預混和分裝:所有的PCR試劑都應進行小量分裝,PCR反應液應盡可能預先配制好,然后再小量分裝,在-20℃下保存,以減少重復加樣次數,從而避免污染機會。另外,PCR試劑、PCR反應液應當與樣品及PCR產物分開保存,不可放于同一冰盒或冰箱。
    3、吸樣槍污染防護:吸樣槍是一個非常容易發生污染的設備。如操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內或粘在槍頭上,將會成為一個嚴重的污染源,因而使用吸樣槍時要格外小心,吸樣要慢,并盡量一次性完成,忌多次抽吸,避免發生交叉污染或氣溶膠污染。
    4、減少PCR循環次數:以PCR產物達到檢測水平為宜。
    5、防止操作人員污染:使用一次性手套、吸頭、小離心管。

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