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  • 發布時間:2021-05-17 15:05 原文鏈接: PCR反應體系有哪些?

      1. 緩沖液

      標準的緩沖液含 1pmol/ml Tris ·HCl,其 pH 為 8.3-9.0(室溫),而在延伸溫度(72 ℃)下,pH 值接近 7.2 。緩沖液中含有一種二價陽離子,用于激活 DNA 聚合酶的活性中心,一般使用 Mg2+。

      2.dNTP

      脫氧核糖核苷三磷酸的縮寫,是包括 dATP, dGTP, dTTP, dCTP 等在內的統稱,即合成新的 DNA 鏈的材料。4 種 dNTP 的濃度相等,總濃度一般為 200pmol/ml (即飽和濃度)。dNTP 可與 Mg2+ 結合,使游離的 Mg2+ 濃度下降,影響 DNA 聚合酶的活性。

      3. 引物

      引物是一段短的單鏈 DNA 片段,可結合在核酸鏈上與之互補的區域,其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點,DNA 聚合酶可由其 3′端開始合成新的核酸鏈。引物長度一般以 18~30bp 為宜,過短則降低特異性,過長則會引起引物間的退火而影響有效擴增,同時也增加引物合成的成本。引物的堿基順序不能與非擴增區有同源性。

      4. 模板

      模板是一段單鏈或者雙鏈 DNA,提供用于進行 PCR 擴增的原始信息。對模板的純度要求低,但不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA 聚合酶抑制劑、DNA 結合蛋白等。模板 DNA 應該盡量保持低溫保存。

      5.Taq DNA 聚合酶

      Taq DNA 聚合酶以 DNA 為復制模板,從將 DNA 由 5' 端點開始復制到 3' 端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA 的合成(在具備模板、引物、dNTP 等的情況下)及其相輔的活性。必須一直保存于-20℃,內含甘油保存。最適反應溫度 72 ℃,即延伸溫度。通常在配制 PCR 體系的最后加入。

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