分光光度法
| 實驗方法原理 | PPO催化各種酚與O2氧化為醌。本實驗是采用鄰苯二酚為底物，在0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液PH5.8的反應體系中，PPO催化鄰苯二酚形成褐色的醌，在分光光度計410nm處使反應體系的OD值產生變化，通過OD值上升的讀數變化確定PPO的酶活大小。 |
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| 實驗材料 | 多酚氧化酶粗酶液 |
| 試劑、試劑盒 | 鄰苯二酚溶液 檸檬酸緩沖液 鄰酸二氫鈉 硫酸銨沉淀組分 DE-52洗脫組分 葡聚糖凝膠洗脫組分 |
| 儀器、耗材 | 試管 恒溫水浴 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
在含有4mlPH5.8的0.2M磷酸氫二鈉－0.1M檸檬酸緩沖液試管中加入0.05ml0.05M鄰苯二酚溶液，在30℃恒溫水浴中預熱后加入0.05ml酶液，反應5分鐘，在分光光度計410nm處讀取吸光值。在上述條件下，以A410讀數，以每分鐘增加0.01O.D.值定義為一個酶活性單位（U）。
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| 注意事項 |
1.反應混合液必須現配現用，否則會因鄰苯二酚自動氧化而失效； 2.加樣時，先加緩沖溶液，再加底物鄰苯二酚，搖勻，在測量之前最后加酶提取液。 3.在試驗中加入一種酚結合劑--聚乙烯吡咯烷酮（PVPP），它能與酚類化合物強烈地發生締合作用，從而消去酶反應體系中的底物，使?PPO活性的測定更接近其真值
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| 其他 |
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