實驗材料:染色質
試劑、試劑盒:精胺、精咪、Percoll、溶液
儀器、耗材:聚碳酸酯離心管
實驗步驟:
1. 在體積為 10 ml 分離得到的染色質物質中加入精胺和精咪至終濃度分別為 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。
2. 加入 10 ml Percoll 溶液,勻漿分離得到的染色質。
Percoll 溶液:
89% (v/v) Percoll
5 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4)
2 mmol/L EDTA
0.8 mmol/L 精胺
2 mmol/L 精咪
0.1 % 毛地黃皂苷
3. 再加 15 ml Percoll 溶液到勻漿中,充分混勻。
4. 將 35 ml 的 Percoll 混合物加入 50 ml 的聚碳酸酯離心管中,用一固定角度轉頭(Beckman Instruments) 在 4℃,20000 r/min 離心 30 分鐘。
5. 吸出染色體帶上面的全部物質,將梯度中的染色體回收于大約 10 ml 的 Percoll 溶液中。
6. 為了除去 Percoll 顆粒,以 1:2 比例用稀釋緩沖液稀釋染色體,1400 g 離心 45 分鐘進行濃縮。