exosome是直徑約為30-150nm的小囊泡，在30年前被人們所發現。exosome天然存在于所有體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，且其蛋白、RNA和脂肪成分特異，早期的研究認為，exosome執行蛋白運輸功能，特異靶定受體細胞，交換蛋白和脂類或引發下游信號事件。直到2007年，研究人員發現exosome也運輸核酸，參與細胞間通訊。至此，這種小囊泡才被人重視，并成為熱門的研究對象。細胞外微泡， 運載RNA（包括mRNA、miRNA、lncRNA）、DNA及蛋白質，為細胞間信號交流起著重要作用。 QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Kit改進了傳統的超速離心微泡分離方法，能夠在20分鐘內快速純化得到細胞外囊泡。該試劑盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技術，通過離心柱和特制緩沖液，從多達4 ml的預過濾血漿中分離exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技術分離總RNA。整個實驗流程，從血清/血漿樣本到RNA產物，只需1小時。 性能優勢： exoRNeasy純化exosomes和其他細胞外微泡與超速離心法相比，不僅速度更快，并且產物純度更高。掃描電鏡顯示，雖然這兩種純化技術都能夠純化預期大小的完整的囊泡，但超速離心法的產物還含有很多不符合預期的更小、或其他形狀的細胞結構。 通過RT-qPCR實驗對exoRNeasy純化的RNA產物和exoEasy分離柱流出液進行分析，結果顯示，exoRNeasy的產物包括血漿中所有mRNA，包括細胞外囊泡的miRNA，且不含細胞。 操作流程 ： 從細胞外微泡分離RNA的完整實驗包括兩步：純化exosomes和分離RNA。在exosomes純化步驟，預過濾的血漿（不包含大于0.8 μM的微粒）與Buffer XBP混合，加至exoEasay親和性膜離心柱上，結合到柱上。使用Buffer XWP洗滌結合在膜上的囊泡，之后使用QIAzol裂解。在RNA分離步驟，在QIAzol洗脫液中加入氯仿，回收水相，將其與乙醇混合。包括miRNA在內的總RNA結合到離心柱上，洗滌三次后洗脫。 |