標記細胞

乙酸緩沖液

漩渦器

1. 收獲標記細胞。

2. 小心處置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸緩沖液懸浮細胞沉淀，每 1 ml 壓積細胞用 10 ml 緩沖液。

3. 于室溫用漩渦器振蕩裂解細胞。

4. 加等體積的水飽和酚，充分混勻，于 60℃ 加熱 5 分鐘。

5. 再次用旋渦器振蕩混勻，冰浴 15 分鐘。

6. 于 4℃ 以 5000 g 離心 10 分鐘，此時溶液很清楚地分成 4 相：底部一小塊不溶的沉淀，往上是酚相，再上是連接處的白色 SDS 相及上層含 RNA 的水相。

7. 吸出上層水相至新離心管，加 2.5 倍體積含 2% 乙酸鈉的乙醇沉淀 RNA，將離心管于 -20℃ 或 -70℃ 放置幾小時以充分沉淀 RNA。

8. 離心回收 RNA，抽干，將沉淀溶于少量 TE 緩沖液。