實驗材料 標記細胞
試劑、試劑盒 乙酸緩沖液
儀器、耗材 漩渦器
實驗步驟
1. 收獲標記細胞。
2. 小心處置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸緩沖液懸浮細胞沉淀，每 1 ml 壓積細胞用 10 ml 緩沖液。
3. 于室溫用漩渦器振蕩裂解細胞。
4. 加等體積的水飽和酚，充分混勻，于 60℃ 加熱 5 分鐘。
5. 再次用旋渦器振蕩混勻，冰浴 15 分鐘。
6. 于 4℃ 以 5000 g 離心 10 分鐘，此時溶液很清楚地分成 4 相：底部一小塊不溶的沉淀，往上是酚相，再上是連接處的白色 SDS 相及上層含 RNA 的水相。
7. 吸出上層水相至新離心管，加 2.5 倍體積含 2% 乙酸鈉的乙醇沉淀 RNA，將離心管于 -20℃ 或 -70℃ 放置幾小時以充分沉淀 RNA。
8. 離心回收 RNA，抽干，將沉淀溶于少量 TE 緩沖液。
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