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  • 發布時間:2019-08-02 22:58 原文鏈接: RNA提取的流毒非淺的經典誤區

    RNA提取的流毒非淺的經典誤區(RNA提取的實踐指南) 

    最近碰到了好幾個RNA提取的初學者來實驗室學習如何提取RNA,對于如此簡單的操作,卻有如此多的人提取不出來,細問一下,原來他們的知識來源都是書本上或者網上的“RNA提取注意事項一類”的所謂經驗,其實,他們提取不出來的真正原因,恰恰是他們嚴格遵守了所謂的經驗,精力全放在不需要注意的地方,結果搞得自己很緊張, 真正需要注意的操作反而沒有注意了。下面我就結合生物通上常見的RNA 操作注意事項與實驗技巧的文章 
    (http://www.ebiotrade.com/newsf/2004-3/B2004312163158.htm)指出提取RNA的流毒非淺的常見誤區: 
    1.“ 如果可能,實驗室應辟出專門RNA操作區,離心機、移液槍、試劑等均應專用。RNA操作區應保持清潔,并定期進行消毒。” 
    完全錯誤,任何普通的試驗臺,不需要任何消毒,暴露在空氣中就可以。用我的話說就是垃圾堆里面我都可以提取出RNA!有的學生告訴我他們在哪里提取的, 他們在超凈臺里面操作,只有兩個孔伸手進去,操作及其不便,還容易使人疲勞,風干RNA沉淀的時候,也看不清楚,常常造成要么干過頭,要么乙醇殘留高。空氣中有RNA酶污染,還到處亂飄,還會到離心管子里面降解RNA,誰告訴你的?你看見了?你做過實驗了?人家說啥你就信?如果真是這樣空氣到處飄RNA酶,你的電泳槽,電泳儀,電泳液總不可能放到超凈臺電泳吧?你配制電泳緩沖液總不能不暴露在空氣中吧?電泳液體,電泳槽不知道早就被飄進多少RNA酶了,那還怎么跑電泳,全部降解!可能嘛?更何況超凈臺空氣凈化過濾的是細菌大東西,RNA酶蛋白分子那么小它能過濾得掉嘛,所以如果空氣中有RNA酶,超凈臺也擋不住的。稍微分析一下就明白了。實際上,隨便啥普通實驗室的試驗臺提取RNA,幾百次了,從未因為沒有在超凈臺提取就降解RNA的。 
    2.“操作過程中應自始至終佩戴拋棄式橡膠或乳膠手套,并經常更換,以避免將手、臂上的細菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶入試管或污染用具。盡量避免使用拋棄式塑料手套。塑料手套不貼身,常常造成操作不便,而且多出部分還容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染處傳遞,擴大污染。 
    這是流傳最廣的錯誤,因為手上的RNA酶,按照正常的操作,怎么可能帶到離心管里面?即使沾到離心管壁外面了,對里面的RNA也完全沒有影響啊。難道你是嶗山道士,不帶手套抓住離心管子,手上RNA酶可以透過塑料管穿墻過去降解RNA?如果你有這個本事,塑料管子都可以穿透,再戴個手套那不也可以穿透?穿2條褲子放屁和穿一條褲子放屁一樣擋不住污染大氣-多此一舉。如果說你不戴手套,你手上的RNA酶多到可以隨時掉下來,掉渣,掉到離心管子里面。那不是提取RNA的問題,那是衛生問題,你該洗手或者洗澡了。除非有人參觀,我一般提取RNA根本不注意是否帶了手套,戴手套也是為了保護手不沾到苯酚,氯仿。 而不是怕污染。至于擴大污染一說, 完全是胡扯,試驗臺上早就到處是飛沫,手接觸后留下的RNA酶,早就污染完全了,再說,還是我剛才說的,它們怎么可能轉到小離心管里面? 
    3.研缽去干烤。 
    不需要,洗干凈,晾干就可以了,即使里面有一些RNA酶殘留,有液氮的時候如此低的溫度下怎么可能降解RNA,轉到裂解液后,外源,內源的RNA酶就會被全部抑制。何況,組織里面那么多的內源性RNA酶研磨的時候都不會降解RNA,殘留一點在研缽上的RNA酶就會嗎?實際操作,研缽洗干凈(避免交叉污染就行),然后晾干,或者用紙擦干就直接用了。殘留一點不會影響。 
    4.操作時候戴口罩,帽子,不說話。 
    不需要, 除非你提取的時候唾沫橫飛, 而且特別準確,有一滴飛入了你手上拿的1.5毫升的離心管。總之,我邊提取的時候, 邊要和學生大談,提取RNA如何如何的簡單。 
    5.用DEPC處理槍頭, 小離心管。 
    不需要,國外的槍頭,離心管散裝的,裝好在槍頭盒里面 ,直接可以用,不需要高壓滅菌。國產的我用得不多, 反正我買過浙江產的2分錢一個的離心管,照樣不需要DEPC處理,不需要高壓,打開了,直接用。總之做不出來, 首先千萬不要找槍頭,離心管是國產質量不好的原因。道理很簡單,高溫高壓生產線的塑料管子早就經歷了幾百度高溫的融漿狀態,早就RNA酶滅活干凈了。退一萬步,即使污染了RNA酶,至少和裂解液接觸的槍頭離心管子全部不用處理吧?。舉個例子,如果用一個污染了RNA酶的槍頭去吸取裂解液,會發生下面哪種情況:1.槍頭把RNA提取裂解液污染了。2.裂解液把槍頭RNA酶給滅活了。想想內源性提取的細胞的那么多RNA都可以被裂解液滅活好好的。槍頭一點污染能不滅活?

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