• <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 發布時間:2020-09-07 12:15 原文鏈接: RNA甲醛變性電泳實驗原理和操作

    [原理] 用溴化乙錠等熒光染料示蹤的核酸電泳結果可用于判定核酸的純度。由于DNA分子較RNA分子大許多,電泳遷移率低;而RNA中以rRNA最多,占到80%~85%,tRNA及核內小分子RNA占15%~20%,mRNA占1%~5%。故總RNA電泳后可呈現特征性的三條帶。在原核生物為明顯可見的23S、16S的rRNA條帶及由5S的rRNA及由5S、5.8S的rRNA和tRNA構成的條帶。mRNA因量少且分子大小不一,一般是看不見的。故可通過分析以溴化乙錠為示蹤染料的核酸凝膠電泳結果。


    [試劑]

    1. 瓊脂糖

    2. 0.1%DEPC處理的水

    3. 10×電泳緩沖液

    MOPS(嗎啡代丙烷磺酸)0.2mol/L

    EDTA 0.01mol/L

    NaAc 0.05mol/L

    用2mol/L氫氧化鈉調節pH至7.0,臨用時用DEPC水稀釋。

    4. 上樣緩沖液

    0.5ml甲酰胺(100%)

    0.2ml甲醛(37%)

    0.1ml 10×電泳緩沖液

    0.06ml溴酚蘭(飽和溶液)
    易生物儀器庫:http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html
    易生物試劑庫:http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html

    [儀器]

    1.電泳儀

    2.電泳槽

    3.移液嘴

    4.燒杯

    5.微量離心管

    以上器皿均分別用去污劑溶液、自來水、雙蒸水沖洗,然后用乙醇干燥,DEPC處理的水徹底沖洗。


    [操作]

    1. 電泳膠(50ml)制備 稱0.55克瓊脂糖加36mlDEPC處理過水,加熱溶解瓊脂糖,冷卻至60℃,加3μl溴乙錠(1g/L)、9ml 甲醛(37%)和5ml 10×電泳緩沖液,然后灌制凝膠,于室溫放置30分鐘以上使凝膠凝固。


    2. RNA樣品處理 在一滅菌的微量離心管中加入2μl RNA 樣品(約4μg),加5μl上樣緩沖液,至60℃水浴15分鐘使RNA變性,再冰浴。


    3. 電泳 將樣品加入加樣孔,3~4V/cm電泳,當溴酚蘭移動到膠的3/4處停止電泳。


    4. 觀察結果 紫外燈下可見28S、18S和5S rRNA三條帶,觀察28S和18S二條帶是否清晰,若28S的熒光強度為18S的二倍以上,則說明RNA分子沒有降解。


  • <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 东京热 下载