• <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 發布時間:2022-10-18 16:38 原文鏈接: RNA聚合酶鏈式反應(PCR)步驟

    1),準備工作

        8, 實驗器具與材料: (1)移液槍:200ul、10ul (2)吸頭:200ul、20ul

        (3)吸頭臺:放置 200ul 和 20ul 的吸頭一個 (4)EP 管 1.5ml、100ul

    2),實驗器具的處理與準備

        (1) 塑料制品:(包括吸頭、EP 管等)

        送至高壓 3 次,試驗前將槍頭放入吸頭臺。 

    3), 試劑配制和準備:

        (1) 雙蒸水: 100ml 鹽水瓶內裝 40ml 蒸餾水,送至高壓,后分裝到幾個 1.5mlEP 管中, -20°C中保存備用。

        (2) PCR 中所需要的各種試劑 三,PCR 時注意事項:

        佩戴一次性手套,同時避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。

           4),PCR 步驟

        1, 準備 100ul EP 管

        2, 依次在管中加入:(50ul 反應體系)

        ddH2O

        10mM dNTP

        10×PCR buffer

        25mM Mgcl2 (加之前要搖勻) 上游引物

        下游引物

        模板cDNA 1ul

        3, 稍離心

        4, 100°C沸水浴 1 分鐘

        5, 趁熱加入 Tag 酶 0.5ul(冰上操作) 6, 再加入 50ul 液體石蠟封閉

        7, 10000rmp 離心 1 分鐘

        8, PCR 條件

        94°C 1min

        58°C 50sec

        72°C 1min30sec

        進行 40 個循環,然后 72°C 10min 完后 4°C保溫。

        9,10000rmp 離心 5min

        10,將下層水相轉入新的 0.65mlEP 管中,-20°C保存。


  • <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 东京热 下载