一，準備工作
1， 實驗器具與材料: (1)移液槍:200ul、10ul (2)吸頭:200ul、20ul (3)EP 管 1.5ml、100ul (4)水浴箱 2，實驗器具的處理與準備
逆轉錄(RT)
塑料制品:(包括吸頭、EP 管等)
將塑料制品逐個浸泡于 1‰DEPC 水中(必要時小槍頭需要用吸管打
入 DEPC 水)37°C過夜，然后送至高壓 3 次，后在 80°C烘烤箱中烘干(或置于
37°C中 8 小時左右烘干)，試驗前將槍頭放入吸頭臺。 3，試劑配制和準備:
(1)DEPC 水:泡實驗器具的 DEPC 水的配制:1000ml 雙蒸水中加 1mlDEPC，放在 1000ml 容量瓶中靜置 4 小時后備用。逆轉錄中所用的 DEPC 水的配 制:100ml 鹽水瓶內裝 40ml 雙蒸水，加 40ulDEPC，37°C過夜，送至 高壓，后分裝到幾個 1.5mlEP 管中，-20°C中保存備用。
(2)RT 中所需要的各種試劑 (3)引物濃度計算方法: (新合成的引物的稀釋)
假如終濃度為X uM(pmol/ul)
加DEPC水體積(ul)=(OD×33×1000000)/(分子量×X) 二，RT 時注意事項:
為避免 RNA 酶污染，在 RT 中仍要佩戴一次性手套和口罩。 三，RT 步驟
用 SSIII逆轉錄酶進行 RT(20ul 體積)
1， 準備0.65ml的EP管
2， 冰上操作:在EP管中加入10ulDEPC水，1ul引物，1ul模板RNA，1uldNTP，短 暫離心。
3， 65°C水浴5分鐘后，立刻0°C冰水浴至少1分鐘。
4， 短暫離心后，冰上操作:加入4ul5×First-StrandBuffer，1ul0.1MDTT，1ulRNAse Inhibitor，1ul SSIII逆轉錄酶。
5， 短暫離心
6， 50°C水浴60分鐘進行逆轉錄。
7， 70°C水浴15分鐘滅活逆轉錄酶
8， -20°C保存，或立即進行PCR。
用 AMV 逆轉錄酶進行 RT(10ul 體積)
1， 準備 0.65mlEP 管
2， 加入 4.5ul DEPC 水，1ul 引物，1ul 模板 RNA
3， 稍離心，100°C沸水裕 1min
4， 加入 0.5uldNTP，2ul 5×Buffer，1ul AMV 逆轉錄酶 5， 稍離心，封口膜封口，42°C水浴 90°C作 RT
6， 100°C沸水裕 3min 滅活 AMV
7， 立即 PCR 或-20°C保存。