兩步法RT-PCR比較 常見,在使用一個樣品檢測多個mRNA時比較有用。然而一步法RT-PCR具有其他優點。一步法RT-PCR在處理大量樣品時易于操作,有助于減少殘余污 染,因為在cDNA合成和擴增之間不需要打開管蓋。一步法可以得到更高的靈敏度,最低可以達到0.1pg總RNA,這是因為整個cDNA樣品都被擴增。 對于成功的一步法RT-PCR, 一般使用反義的基因特異性引物起始cDNA合成。 一步法 兩步法 起始第一鏈cDNA合成使用: 起始第一鏈合成使用 Oligo(dT) GSP引物 隨機六聚體 GSP引物 優點 優點 靈活 方便 引物選擇 擴增酶同逆轉錄酶預先混合 擴增酶的選擇 轉管步驟少,減少污染可能性 困難RT-PCR的優化能力 高靈敏度 同 Platinum酶結合提高特異性 適用于大量樣品分析 同PlatinumPfxTaqDNA聚合酶結合提高忠實性 適用于定量PCR 適用于在單個樣品中檢測幾個mRNA
根據新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南(第二版),新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測主要是實時熒光RT-PCR方法。新型冠狀病毒核酸測定(實時熒光RT-PCR方法)1.推薦選用針對新型冠狀病毒的O......
2010年1月6日,北京–安捷倫科技公司(NYSE:A)今天宣布推出了AffinityScript一步法RT-PCR試劑盒。這一試劑盒的問世意味著安捷倫Stratagene產品部又一次攜市場領先的高性......
本文主要談談個人對RT-PCR的一些看法,以及操作過程中的注意點。......