• <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 發布時間:2021-06-29 13:05 原文鏈接: RtPCR實驗準備及與操作步驟

    一、實驗器具與材料:
    1、移液槍:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl
    2、吸頭:1ml、200μl、20μl
    3、勻漿管:5ml
    4、吸頭臺:放置1ml吸頭的一個,放置20μl吸頭的一個
    5、EP 管:1.5ml、0.2ml、100μl
    6、試劑瓶:2個60ml的棕色試劑瓶(廣口,帶蓋)
    1個125ml的白色試劑瓶(放無水乙醇)
    7、量筒:50ml、250ml、500ml
    8、容量瓶:250ml、500ml、1000ml
    9、試管架:5ml、 1.5ml、20μl
    10、鹽水瓶:250ml、500ml各2個備用,一個裝無水乙醇,另一個裝DEPC水
    11、鋁制飯盒:4個
    12、塑料小飯盒:1個
    13、大瓷缸:2個
    14、錫泊紙:一卷
    15、卷紙:2卷
    16、三角燒瓶:帶蓋,稍大
    易生物儀器庫:http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html
    易生物試劑庫:http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html

    二、實驗器具的處理與準備
    1、塑料制品:(包括槍頭、EP管、勻漿管等)
    先將DEPC水從容量瓶中倒入瓷缸中,將塑料制品逐個浸泡其中,其中小槍頭需要吸管打入DEPC水,過夜,然后高壓,再烤干備用,實驗前將槍頭等放入吸頭臺,再高壓一次(EP管)
    2、玻璃制品:泡酸過夜,沖洗干凈,蒙錫紙烤干備用(DEPC水泡)(洗凈后先泡1‰DEPC過夜,再烤干)
    3、勻漿器:(包括剪刀、鑷子)先洗凈后,再高壓(不需要泡DEPC)
    三、試劑配制:
    1、DEPC水:吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰DEPC水,放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。
    2、75%乙醇:用無水乙醇+DEPC水配,然后放-20℃保存(其中DEPC 水需先高壓)
    3、異丙醇:放入棕色瓶中
    4、氯仿:放入棕色瓶中
    5、瓊脂糖
    四、幾種緩沖液的配制:
    1、電泳緩沖液:
    Tris 54g
    硼酸 27.5g
    0.5M EDTA 20ml? pH8.0
    蒸溜水 1000ml
    5×TBE (貯存液)
    再將5×TBE稀釋10倍成0.5TBE就可以在電泳時使用(即工作液濃度),如取50ml貯存液+450ml水--→500ml工作緩沖液
    2、上樣緩沖液:
    0.25%溴酚藍
    0.25%二甲苯青FF
    30%甘油
    6×緩沖液,4℃保存
    五、瓊脂糖凝膠的配制:
    1、 1.0%:
    1.0g瓊脂糖+100ml電泳緩沖液,微波爐中火30秒至沸騰,熔化的瓊脂物冷卻至60℃時加入10mg/ml溴化乙錠 2.5μl,充分混勻,將溫熱的凝膠倒入已置好梳子的膠膜中,在室溫下放置30-45min后現進行電泳。
    2、1.5%:
    同上,將瓊脂糖的量改為1.5g

  • <noscript id="yywya"><kbd id="yywya"></kbd></noscript>
  • 东京热 下载