試劑、試劑盒 丙烯酰胺單體貯液磷酸緩沖液貯液咪唑緩沖液貯液過硫酸銨 濃縮膠緩沖液貯液分離膠緩沖液貯液SDSTEMED
實驗步驟
SDS 電泳的制膠方法與 “垂直平板電泳的制膠” 和 “水平平板電泳的制膠” 所述的常規聚丙烯酰胺凝膠的灌注方法基本相同，只是在 SDS 電泳制膠時單體貯液不需要抽氣，以免產生泡沫，且聚合后的凝膠在室溫下，而不是在 4℃ 放置過夜，這樣既可使凝膠充分 聚合，以提高電泳的分辨率，又防止 SDS 在凝膠中結晶。自制的 SDS 凝膠最多可在室溫下保存 4 天。因為 SDS 的高 pH 會使丙烯酰胺水解。如果需要長期保存，最好選用 pH 6.7 的 Tris-醋酸緩沖液。
不管是垂直電泳，還是水平電泳，SDS 連續電泳用的凝膠灌注方法十分簡便，請參閱 “制膠” 。表 5.4 為凝膠配方，貯液配置如下：
1. 丙烯酰胺單體貯液
11.1 g 丙烯酰胺 + 0.3 g N，N'-甲叉雙丙烯酰胺，先用 35 ml 雙蒸水溶解，攪拌，直到溶液變成透明，再用雙蒸水稀釋至 50 ml, 過濾。用棕色瓶可在 4℃ 保存一個月。兩種丙烯酰胺單體及溶液是中樞神經毒物，要小心操作。
2. 磷酸緩沖液貯液（0.2 mol/L，pH 7.1 )
19.5 g NaH2PO4·2H2O + 129.0 g Na2HPO4·12H2O + 5 g SDS，用雙蒸水溶解到 2.5 L，檢査 pH。
3. 咪唑緩沖液貯液（0.1 mol/L，pH 7.0 )
17.0 g 咪唑 + 5 g SDS + 1.5 L 雙蒸水，用稀磷酸調至 pH 7。用雙蒸水稀釋至 2.5 L，再檢査 pH。
4. 10% 過硫酸銨
0.1 g 過硫酸銨 + 1 ml 雙蒸水。使用前新鮮配制。
在不連續電泳系統中，LaemmLi 使用的 Tris-甘氨酸緩沖液仍然是現在通常使用的緩沖系統。表 5.5 為凝膠配方，貯液配置如下：
1. 丙烯酰胺單體貯液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉雙丙烯酰胺，先用 35 ml 雙蒸水溶解， 攪拌，直到溶液變成透明，再用雙蒸水稀釋至 50 ml，過濾。用棕色瓶可在 4℃ 保存一個月。兩種單體和溶液都是中樞神經毒物，要小心操作。
2. 濃縮膠緩沖液貯液（1 mol/L Tris-HCl，pH 6.8)
6.06 g Tris 溶解在 40 ml 雙蒸水中，用 4 mol/L 鹽酸調節 pH 至 6.8，再用雙蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分離膠緩沖液貯液（1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8)
9.08 g Tris 溶解在 40 ml 雙蒸水中，用 4 mol/L 鹽酸調節 pH 至 8.8，再用雙蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 10% SDS
25 g SDS，用雙蒸水溶解至 250 ml。室溫保存。
5. 10% 過硫酸銨
0.1 g 過硫酸銨 + 1 ml 雙蒸水。使用前新鮮配制。
6. 10% TEMED
0.1 ml TEMED + 0.9 ml 雙蒸水
灌注垂直電泳用的凝膠必須按 “垂直平板電泳的制膠” 中所述的方法，先灌注分離膠，加保護層，聚合后再灌注濃縮膠，并插入合適的梳子。
灌注水平電泳用的凝膠可以先灌注濃縮膠，接著灌注分離膠，所以在濃縮膠中應加適量的 87% 甘油，見表 5.6。灌注方法請參閱 “水平平板電泳的制膠” 。
1980 年 Gorg 等介紹薄層聚丙烯酰胺小孔梯度凝膠 SDS 電泳。由于小孔梯度凝膠的分子篩效應以及甘油黏度減小了電泳中的擴散，即使對寬范圍分子質量的復雜樣品也能很好地分離并精確地計算其亞基分子質量。
小孔梯度凝膠的灌注方法參見 “水平平板電泳的制膠" 。凝膠配方見表 5.7，貯液配置如下：
1. 丙烯酰胺單體貯液
14.55 g 丙烯酰胺 + 0.45 g N，N'-甲叉雙丙烯酰胺，先用 35 ml 雙蒸水溶解, 攪拌，直到溶液變成透明，再用雙蒸水稀釋至 50 ml, 過濾。用棕色瓶可在 4℃ 保存一個月。兩種單體和溶液都是中樞神經毒物，要小心操作。
2. 濃縮膠緩沖液貯液（0.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 6.8 )
3.03 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 疊代鈉溶解在 40 ml 雙蒸水中，用 4 mol/L 鹽酸調至 pH 6.8，再用雙蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
3. 分離膠緩沖液貯液（1.5 mol/L Tris-HCl，0.4% SDS，pH 8.8)
9.08 g Tris + 0.2 g SDS + 5 mg 疊代鈉溶解在 40 ml 雙蒸水中，用 4 mol/L 鹽酸調至 pH 8.8，再用雙蒸水加至 50 ml。4℃ 保存。
4. 40% 過硫酸銨
400 mg 過硫酸銨溶在 1 ml 雙蒸水中，使用前新鮮配置。