SOP介紹（二）

3.5 梯度程序的運行 按operate methods鍵，進入梯度方法運行窗口，將光標移至table處，輸入欲運行的表號(1-15)，按顯示屏對應功能鍵start run，運行。在設置時，如有疑問，可用HELP提示每個設置的含義。

3.6 實驗結束 對泵進行沖洗后，關閉流量，注意流速必須要逐步變化。沖洗順序:如果使用有緩沖液的流動相，則停泵前一定要用HPLC級純水清洗HPLC系統。同時用清水清洗柱塞桿。若停泵存放時間超過一天，則停泵前還需用水/甲醇清洗系統。

3.7 關閉電源開關。

4 進樣

4.1 采用7725i手動進樣器，進樣環（loop）體積為20μl，上樣量在10~20μl時，進樣體積必須大于loop體積的3-5倍，才能得到好的重現性，上樣量小于10μl時，可以用10μl的微量進樣器直接進樣。進樣后，快速旋轉進樣器的把柄，直接把樣品進到色譜柱的柱頭。

4.2 在做標準曲線時，進樣濃度應由低到高。

5 信號檢測及數據處理

5.1 本系統用996型二極管陣列檢測器，波長范圍在190-800nm，接受全波長光譜。在分析過程中測定吸收信號由計算機進行處理，顯示色譜圖或光譜圖，列出數據處理結果。測量結束時按規定退出程序后關機。

5.2 點燈，指示燈亮。診斷，檢查校準。狀態燈點亮，處于準備狀態。穩定1小時后可以用于采集數據。

5.3 常規準備工作  按色譜儀、檢測器、打印機及計算機順序接通電源。

5.4 進入Millennium32菜單，按Login，輸入User Name and Pass Word后，按OK。

5.5 按Configure System進入子菜單，在建New chromatography System， 先刪舊的，單擊Project ，建New chromatography System，選擇所需要的W600，及檢測器（PDA or ELSD）,輸入System Name，按Finish。

5.5 使用Run Sample窗口可采集處理和報告數據

5.5.1 從Millennium32 登錄窗口，雙擊Run Sample。

5.5.2 從Run Sample 對話框，選擇色譜系統并單擊確定，將建立BusLAC/E連接。

5.5.3 從菜單條中選擇Edit>New Method Set單擊Yes。

5.5.4 單擊New Create以創建新儀器方法。屏幕上顯示Edit Instrument Method。單擊各儀器。

以編輯儀器參數，然后選擇File>Save As以命名、標記（約束應用環境）并保存方法。然后選擇File>Exit。

5.5.5 出現Select Instrument Method對話框。選擇剛剛創建的方法，然后單擊Next。向導將提示用戶輸入適用于方法的信息。

5.5.6 Method Set Editor對話框將出現。核實信息，然后選擇File> Exit。

5.5.7 在Run Sample對話框中，單擊Sample選項卡，在樣品表中輸入樣品信息。使用水平滾動條訪問每行中的所有信息。

5.5.8 單擊工具條上的 （Amounts），為各標準樣品瓶輸入組份名稱和濃度。選擇File> Exit，返回Run Sample。

5.5.9 核實運行模式是否設置成Run And Process或Run And Report。如有必要，使用下拉列表更改該條目。

5.5.10 選擇File> Save Sample Set Method以保存方法。

5.5.11 使用Intrument Method下拉列表選擇儀器方法。單擊設置。

5.5.12 要收集數據，請單擊工具條上的 （綠燈）。

5.6 使用處理向導創建處理方法

5.6.1 從Millennium32 登錄窗口，雙擊Browse Project。選擇要使用的Project

5.6.2 單擊通道選項卡，然后單擊工具條上的 （Review）。出現查看屏幕。

5.6.3 單擊工具條上的 （Process Method Wizard），然后單擊確定。從下拉列表中選擇適當的處理類型，然后單擊確定。向導將引導您逐步完成積分和校正參數的設置。

5.6.4    要在處理方法中輸入某組份的多個濃度，或給它添加高級積分，請選擇View> 處理方法布局

5.6.5 選擇File>Save As> Method Set，將該處理方法保存為方法組的一部分。

5.7 查看結果

5.7.1 在Project窗口中，單擊Result選項卡

5.7.2 加亮顯示感興趣的樣品（未知樣或標準樣），然后單擊Review圖標。查看窗口顯示色譜、保留時間和組份名稱。

5.7.3 單擊窗口底部狀態條中的Peak選項卡，顯示峰信息。對于PDA 數據，如果在處理方法中選擇了Peak Purity和Library，則會顯示此兩者的信息。

5.7.4 要查看校正曲線，請選擇Window> Calibration。

5.7.5 要查看結果的所有詳細信息，請選擇Window> Result。

5.7.6 要打印結果，請從Project窗口單擊Result選項卡，然后選擇要打印的結果。單擊 （打印），選擇所需報告，然后單擊確定。