SPR輕松搞定脂類動力學研究

表面等離子共振技術SPR通常被用來分析蛋白與蛋白，蛋白與小分子，蛋白與核酸，蛋白與適配體，蛋白與脂質體等分子間的相互作用。目前另一個非常熱的方向是脂類結合動力學研究，已經有很多科學家使用SPR技術測定了脂類的親和力和脂類系列不同類型的特異性。

為什么要研究脂類的相互作用？

細胞膜由磷脂雙分子層組成含有一千多種脂類。脂類通過靶蛋白直接參與細胞信號的過程，也就是說脂類對于細胞的信號傳導和轉運過程是非常重要的。將近一半多的蛋白都定位在膜上，因此很多脂類與蛋白的相互作用需要被鑒定。

為什么說研究脂類的親和力和特異性很重要？

使用SPR技術對于確定在細胞信號傳導過程中脂類的特異性和膜的親和力有重要作用。在生物化學和生物物理學的一些領域有幾個實驗方法可以測定親和力和特異性，但是SPR技術是一種非標記的技術。

怎樣用SPR 技術研究脂類呢？

SPR專用的LIP-1芯片，其表面含供價偶聯的親脂基團，可以捕獲脂質囊泡 (圖1) 或脂質體，模擬生物膜、是一種研究膜系統的便捷方式 ，可以固定脂質體，也可以使用LIP-1芯片研究轉膜蛋白，將蛋白重組到脂質體上并用LIP-1芯片來捕獲脂質體。

利用SPR 技術研究脂類有什么優勢呢？

SPR技術研究脂類動力的過程操作簡單，實驗周期短；并且可量化分析兩個分子間的相互作用，精確獲取結合常數Ka, 解離常數Kd 和親和力常數KD，為后期的實驗提供幫助。Nicoya還有一類芯片可以固定脂類到芯片上，即MEM-1芯片 其是由疏水的長鏈烷烴分子包被的，脂類分子疏水鏈嵌入疏水層，親水端分布在芯片表面。

利用這兩種芯片可輕松研究：脂質體-蛋白、膜蛋白-蛋白、外周蛋白-蛋白 相互作用，解析細胞生命活動機理。

1) 將 LIP-1 芯片從試劑盒中取出，水洗干凈插入OpenSPR 儀器

2) 以最大流速(150 μL/min)運行OpenSPR 儀器 

3）在達到信號基線后，儀器注入80%的IPA(異丙醇)或酒精進行排氣泡，達到基線后，用緩沖液沖洗樣本環并用空氣排空。

4) 注入 200 μL 的20 mM CHAPS 初始化芯片表面.基線穩定后. 用緩沖液沖洗樣本環并用空氣排空。

5) 降低泵速至 20 μL/min.取稀釋于運行緩沖液中的脂質體 200 μL (濃度 0.1-0.5 mg/mL), 從上樣口注入樣本環，脂質體從樣本環進入流動池，與芯片并相互作用5分鐘 .

6) 基線達到150-200pm并穩定后，即可將和脂質體相互作用的分析物注入

7) 不同濃度的分析，注入1-10mM的HCL 將分析物系統即可，信號實時在線可見。