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  • 發布時間:2019-03-29 18:36 原文鏈接: SYPROOrange熒光染色實驗

    實驗材料

    單向凝膠電泳分離后的蛋白樣品

    儀器、耗材

    鋁箔熒光掃描儀塑料容器

    實驗步驟

    1.電泳結束后,將凝膠置于盛有試劑 A 的塑料容器中,試劑 A 的量要足夠覆蓋整塊凝股。例如,一’塊典型的 mini 膠(8 cmXIOcm 或 8 cmX8 cm) 需用 50~IOOml 的試劑 A。

    2.用鋁箔遮蓋好容器,避免凝膠暴露在強光下。

    3.室溫下搖動凝膠 60 min。

    4.移出試劑 A,留待步驟5 中使用。往盛有凝膠的容器中加入適量的試劑 B,室溫下搖動 lmin。

    延長沖洗時間雖然會降低靈敏度,但背景也會減低。

    5.用熒光掃描儀對凝膠進行掃描(SYPRO Orange 的最大激發光波長是 472nm,最大發射光波長是 570nm)。掃描完后,將凝膠放回試劑 A 中。

    6.雖然熒光信號會隨時間而降低,但凝膠在試劑 A 中還是可以保存幾個星期。

    此外,也可以利用空氣干燥凝膠法保存凝膠,盡管這樣做同樣會導致熒光信號的輕微減弱。至于空氣干燥凝膠,需將凝膠放在兩張濕的玻璃紙中間,拉緊玻璃紙,待膠靜置于空氣中變干。空氣干燥后的凝膠可永久保存

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